1．PEG誘導融合法
? PEG誘導融合的特點：其優點是融合成本低，勿需特殊設備；融合子產生的異核率較
高；融合過程不受物種限制。其缺點是融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害。
? PEG的作用機理： Kao等認為，由于PEG分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極
性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成H鍵，從而在原生質體之間形成分子橋，其
結果是使原生質體發生粘連進而促使原生質體的融合；另外，PEG能增加類脂膜的流動
性，也使原生質體的核、細胞器發生融合成為可能。
? 融合技術要點：
融合液：CaCl2·2H2O 8~10mmol
KH2PO4 0.7mmol
甘露醇或山梨醇 0.5~1.0mol
pH 5.6
誘導液：融合液+PEG 20～45%
稀釋液：A液（g/100ml）pH6.0 B液（g/100ml）pH10.5
葡萄糖7.21甘氨酸0.375
CaCl2·2H2O 0.79 NaOH 0.169
DMSO 10ml
2．電融合法
? 與PEG融合比較起來，電融合有三大優點：一是不存在對細胞的毒害問題；二是融合效
率高；三是融合技術操作簡便。
?電融合儀的結構特點：一是交變電場部分；一是高頻直流電擊部分。
?電融合的基本過程：
細胞膜的接觸：當原生質體置于電導率很低的溶液中時，電場通電后，電流即通過原生
質體而不是通過溶液，其結果是原生質體在電場作用下極化而產生偶極子，從而使原生質體
緊密接觸排列成串；
P1 P2
P1 P2
混合靜止1min.
融 合
融合液
加入PEG
稀 釋洗 滌
加入稀釋液
加入培養基
培 養
選 擇
膜的擊穿：原生質體成串排列后，立即給予高頻直流脈沖就可以使原生質膜擊穿，從而
導致兩個緊密接觸的細胞融合在一起。
? 關于融合參數：電融合中的主要參數包括交流電壓、交變電場的振幅頻率、交變電場的
處理時間；直流高頻電壓、脈沖寬度、脈沖次數等。