先來說說為什么要用內參抗體?內參抗體的真的是必要的嗎?
我舉個例子,印度人和韓國人誰更富有?那還用說,當然是韓國人富有。
可是分明印度的GDP更高,為什么說韓國人更富有呢?
那怎樣實現呢,如果我們能數一數細胞,不同的泳道上同樣數量的細胞是最好的,可是這實現不了。這時候我們就需要一個大致能代表細胞數的參數。
而內參就起到這個作用,Histone H3.1、GAPDH、Actin、Tubulin這些蛋白通常在一個細胞里的表達量比較穩定,如果這些蛋白表達量一致,我們就認為不同泳道里上樣量是一致的。
1.做WB根據目標蛋白分子量來選擇對應的內參,一般目標蛋白與內參蛋白分子量差異15-30kD比較合適;
2.分子量差異太小不便于準確的裁切PVDF膜,差異太大轉膜條件不一致;
3.我們分別提供17kD(P30266)、43kD(M20009)、55kD(M20005)的抗體供選擇;
4.我們還有HSP70、HSP90蛋白抗體,在多種植物中檢測過,但是目前還沒有引用文獻,