一、實驗目的
掌握植物總RNA提取的原理和方法
二、實驗原理
RNA的提取：破壞細胞膜—除去蛋白—除去DNA—除去鹽離子。
RNase是一類生物活性極其穩定的酶類，能耐高溫、耐酸、耐堿，高壓滅菌處理也不能使其完全失活。在提取RNA實驗中，要盡量抑制RNase的活性。
?DEPC（焦磷酸二乙酯）是很強的RNase抑制劑，可以使RNase的活性喪失。實驗中使用的 槍頭、 EP管、溶液都要利用0.1%的DEPC處理，Tris不可以用DEPC處理。耐高溫的玻璃器皿等要在250℃烘烤4小時以上。
?內源的 RNase一般利用蛋白質變性劑除去。如苯酚、氯仿、胍、SDS、十二烷基肌氨酸鈉等。
無水乙醇、高濃度的鹽溶液和異丙醇中可以沉淀RNA或 DNA，前兩者利于沉淀大片段的核酸。
注意：DEPC是一種具有致癌嫌疑的有機物！相關操作要在通風櫥中完成。 另外DEPC對單鏈的 DNA或RNA具有破壞作用，利用DEPC處理過的溶液和物品都要經過高溫滅活處理后才可以使用（DEPC會分解成水和CO2 ） 。所有沾染DEPC的液體或物品在使用、遺棄前要高溫滅活處理。
RNA操作的整個相關實驗過程應該在超凈臺上完成, 操作者應配帶口罩、帽子和手套。
三、實驗材料、器具及藥品
小麥葉片。
高速離心機、研缽、藥匙、濾紙、冰盒、口罩、 手套、EP管架、超凈工作臺、移液器、槍頭等。 預冷的乙醇和70%乙醇、液氮、RNA提取試劑盒等。
四、實驗步驟
打開超凈工作臺和紫外燈，用乙醇燒研缽、藥匙。
2.樣品的裂解:液氮中將組織搗成粉末，液氮揮發后加 1 ml A液，立即用移液器抽打均勻。-20℃冰上靜置10min，
加200μl B液，用力顛倒混勻（20余次），冰上靜置10min，室溫離心12000rpm，10min。
3.小心將上層水相移到另一個離心管中，加等體積 B液，顛倒混勻（20余次），冰上靜置10min，室溫離心12000rpm，10min。
4.再小心將上層水相移到另一個離心管中，加等體積 C 液，顛倒混勻，冰上靜置30min，室溫離心12000rpm，10min。
5. 棄去上層水相，加400μl E液和40μl D液，混勻后55℃水浴5-10min，中間搖動一次。
6. 將上清移到另一個離心管中，加1ml預冷的乙醇，顛倒混勻，冰上靜置30min，室溫離心12000rpm，10min。
7.棄去上層水相，加 1ml預冷的70%乙醇,轉動清洗后倒掉乙醇，在超凈工作臺上吹干。
8.加20μl E液溶解RNA，4℃保存備用。