實驗方法原理 氨基酸與水合茚三酮作用后,能產生二酮茚-二酮茚胺的取代鹽等藍紫色化合物,其顏色的深淺與氨基酸的含量成比例。測定反應產物在520nm波長處的吸光度值 ,即可計算出樣品中氨基酸的含量。
實驗材料 根系傷流液
試劑、試劑盒 95﹪乙醇谷基酸氮標準母液水合茚三酮
儀器、耗材 分光光度計加熱設備試管試管架移液管洗耳球
實驗步驟
一、材料儀器設備及試劑
1.材料:根系傷流液。
2.儀器設備:分光光度計,加熱設備,試管,試管架,移液管,洗耳球。
3.試劑及配制:95﹪乙醇。
50μg· ml-1谷基酸氮標準母液:準確稱取谷氨酸52.52 mg ,溶于100 ml 10﹪異丙醇溶液中。
3﹪水合茚三酮:稱取水合茚三酮3g, 溶于100 ml 95﹪乙醇中。
二、實驗步驟
1. 谷氨酸氮標準曲線制作
(1)取6支試管,編號,按下表配制每管含量為0~25μg的谷氨酸氮標準液。
加入表中試劑后,搖勻,置于沸水浴中準確加熱10min,溶液變為藍色,表示有氨基酸存在,取出后各管立即加入5 ml 95%乙醇,搖勻,冷卻后以0號管溶液作空白對照,于520nm波長下測定吸光度(A)值。
(2)標準曲線繪制
以1~5號管谷氨酸氮含量為橫坐標,吸光度(A)值為縱坐標,繪制標準曲線。
2. 傷流液中氨基酸含量的測定
取3支試管(三個重復),編號,各加入傷流液0.5 ml,蒸餾水1 ml,3﹪水合茚三酮溶液0.5 ml,搖勻,置于沸水浴中準確加熱10min后,取出各管立即加入5 ml 95%乙醇,搖勻,冷卻后以標準曲線0號管溶液作空白對照,于520nm波長下測定吸光度(A)值。
三、結果計算
根據樣品管的吸光度值,從標準曲線上查出相應的谷氨酸氮含量,三個重復求平均值代入下列公式計算傷流液中氨基酸含量。