植物組織中可溶性糖含量的測定（蒽酮比色法）

原理

植物在個體發育的各個時期，代謝活動也發生相應的變化，碳水化合物的代謝也不例外，其含量也隨之發生變化。了解可溶性糖含量的變化，在生理上和實踐上都有重要的意義。這里介紹的是蒽酮比色法，糖在硫酸的作用下生成糖醛，糖醛再與蒽酮作用，形成一種綠色的絡合物，顏色的深淺與糖含量有關。方法簡便，但沒有志一性，對于絕大部分的碳水化合物都能與蒽酮反應，產生顏色。

儀器藥品

　　721型分光光度計 　　　　 　分析天平

　　研缽 　　　　　　　　　　　恒溫水浴鍋

　　燒杯 　　　　　　　　　　　容量瓶

　　三角燒瓶 　　　　　　　　　大試管

　　移液管 　　　　　　　　　　漏斗

　　乙醚 　　　　　　　　　　　草酸鈉

　　飽和醋酸鉛

葡萄糖標準溶液：稱取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成500ml溶液，即得每ml含糖為200μg的標準溶液。

蒽酮試劑：稱取1g經過純化的蒽酮，溶解于1000ml稀硫酸中即得。硫酸溶液由760ml濃硫酸（比重1.84)稀釋成1000ml而成。

操作步驟

1．可溶性糖的提取

稱取重約5g的新鮮植物葉子，于研缽中乙醚少許，仔細研磨成均勻的漿狀物，倒入燒杯中，用70℃熱水洗滌研缽，洗液并入燒杯中，再加蒸鎦水30─40ml。將燒杯放在水浴鍋中加熱，保持溫度70─80℃約半小時，冷卻后1滴1滴地加入飽和中性醋酸鉛，以除去蛋白質，直至加入醋酸鉛時不再形成白色沉淀為止。然后將此混合物連同殘渣一并洗入100ml容量瓶中，加水至刻度，充分振蕩。以干燥漏斗將濾液過濾于一干燥的三角燒瓶中，瓶中事先放有少量（約0.2─0.4g）草酸鈉粉末，以除去濾液中過量的醋酸鉛，使生成草酸鉛沉淀，再行過濾，所得的透明濾液即為可溶性糖提取液。

2．顯色及比色

吸取上述糖提取液1ml，放入一干潔的試管中，加蒽酮試劑5ml混合之，于沸水浴中煮沸10分鐘，取出冷卻，然后于分光光度計上進行測定，波長為625nm，測得吸光度。從標準曲線上查得濾液中的糖含量（或經直線回歸公式計算），然后再行計算樣品中含糖百分數。

3．繪制標準曲線

取標準葡萄糖溶液將其釋成一系列不同濃度的溶液，濃度分別為每ml含糖0、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg。按上述方法分別測得其吸光度，然后繪制A026－糖濃度曲線，或進行直線回歸求得直線方程。

4．計算樣品中含糖%

設V為植物樣品稀釋后的體積(ml)

C為提取液的含糖量(μg/ml)

W為植物組織鮮重(g)