植物組織制備基因組DNA實驗——CTAB法

植物組織

CTAB液2-疏基乙醇TE高鹽TE氯仿異戊醇

研缽離心機培養箱

1.  在所需量的CTAB抽提液中加入2-巰基乙醇，使終濃度達2%。將此溶液及CTAB溶液加熱至65℃。

2.  用液氮（-196℃）或干冰（-78℃）冷卻粉碎器/勻漿器，將植物組織粉碎成為細粉。

3.  將冷凍的組織轉移到一個抗有機溶劑的試管或燒杯中。

4.  往粉碎的組織中加人預熱的2-ME/CTAB，混合使之充分濕潤，于65℃溫育10~60 min，混勻。

5.  用等體積的24：1氯仿/辛醇或氯仿/異戊醇抽提勻漿液，顛倒使充分混合。

6.  于4℃7 500 g 離心5 min，回收上（水）相。

7.  在回收的上層相中加入1/10體積的的65℃的CTAB溶液，顛倒混勻。

8.  用等體積的氯仿/辛醇抽提，混勻，離心，回收上（水）相。

9.  加入正好1體積的CTAB沉淀液，顛倒混勻，如果沉淀可見，繼續做步驟10，否則于65℃溫育30min。

10.  于4℃，500 g 離心5 min。
 

11.  移出上清，但不要丟棄，用高鹽的TE緩沖液重懸沉淀。

12.  如果沉淀難于重懸，于65℃溫育30 min，重復直至所有的或大部分沉淀溶解。

13.  加入0.6體積的異丙醇沉淀核酸，充分混勻，于4℃，7 500 g 離心15min。

14.  用80%乙醇洗滌沉淀物，干燥，用盡可能少的緩沖液重懸。