• <table id="4yyaw"><kbd id="4yyaw"></kbd></table>
  • <td id="4yyaw"></td>
  • 發布時間:2020-08-11 08:50 原文鏈接: 植物組織制備基因組DNA實驗

    實驗方法原理 加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中, 可用玻棒將其取出,而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部, 從而達到提取的目的。

    實驗材料 植物組織

    試劑、試劑盒 抽提緩沖液十二烷基肌氨酸鈉TE異丙醇溴化乙錠氯化銫

    儀器、耗材 離心機

    實驗步驟

    1.   收取10~50 g 新鮮的植物組織。

    2.  植物組織用冷的無菌水洗滌、吸干,放人液氮中凍結,用研缽和研杵研成細粉。

    3.  將凍結的細粉放入250 ml 的離心瓶中,立即加入抽提緩沖液約每克植物5~10 ml,輕輕攪拌混勻。

    4.  加入十二烷基肌氨酸鈉使終濃度達1%,于溫育1~2 h。

    5.  用JA-14轉子4℃,5 500 g 離心10min 保留上清,必要時重復此歩驟以除去殘渣。

    6.  加人0.6體積異丙醇,混合,如果看不見沉淀,于-20℃放置30 min,用JA-14轉子4℃,7 500 g 離心15 min,棄上清。

    7.  沉淀用9 ml TE緩沖液重懸,加入9.7 g 固體氯化銫,混勻,冰上放置30 min,用JA-14轉子,7 500 g 離心10 min,保留上清。

    8.  加入0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙錠,冰上放置30 min,4℃ 7500 g  離心10min.

    9.  將上清轉入兩個5 ml 的快封超離心管中,并封口。

    10.  用VTi80轉子20℃ 525 000 g 離心4 h,或20℃,300 000 g 離心過夜,用15號針頭和注射器收集帶。

    11.  用氯化艷飽和的異丙醇重復抽提DNA以除去溴化乙錠。

    12.  加入2體積水和6體積100%乙醇,混勻,-20℃放置1 h,用JA-20或JA-21轉子4℃,7500 g 離心10 min。

    13.  沉淀用TE緩沖液重懸,加入1/10體積的3 mol/l 乙酸鈉和2體積的100%乙酵重懸,重復離心。

    14.  沉淀晾干后用TE緩沖液重懸。


  • <table id="4yyaw"><kbd id="4yyaw"></kbd></table>
  • <td id="4yyaw"></td>
  • 调性视频