植物的組織培養技術

一． 實驗目的：

1. 學習固體培養基的配制；

2. 掌握胡蘿卜愈傷組織的誘導方法。

二． 實驗原理：

植物組織培養理論依據是植物細胞具有全能性。

植物組織培養是指用無菌培養的方法，在人工制備的培養基上培養植物體的一個離體器官、離體的一種組織，或單個細胞，這些離體的器官組織，或單個細胞在無菌條件下不斷生長，并經過轉移，能夠一代一代的延續生長下去，它的方法與微生動物培養技術相似，全部在人工控制下進行。

組織培養技術內容是20年來已經從組織培養（組織塊培養）發展到 細胞培養 、原生質體培養和細胞融合培養等等。并用之進行各種生理化及遺傳操作研究。

三、實驗劑 試劑 和設備

1． 試劑 一MS培養基需要量mg/L

NH ₄ NO ₃ 1650mg

KNO ₃ 190mg

KH ₂ PO ₄ 170mg

MgSO ₄ .2H ₂ O 370mg

CaCl ₂ .2H ₂ O 440mg

FeSO ₄ .7H ₂ O 2.79mg

MnSO ₄ .7H ₂ O 8.6mg

H ₃ BO ₃ 6.3mg

KI 0.83mg

NaMoO ₄ .2H ₂ O 0.25mg

CuSO ₄ .5H ₂ O 0.025mg

COCl ₂ .6H ₂ O 0.025mg

甘氨酸 0.2mg

VB ₁ 0.4mg

VB ₆ 0.5mg

為了配制培養基方便，通常配制一系列的母液。大量元素可單獨或混合配制成使用濃度的10倍，微量元素可混合配制成使用濃度的1000倍，維生素生長調節物質單獨配制成使用濃度的1000倍，鐵液也單獨配成母液，常用的是EDTA螯和鐵。

2．MS培養基母液的配制

（1）大量元素母液（10倍）配1000ml

NH ₄ NO ₃ 16.5g

KNO ₃ 19g

KH ₂ PO ₄ 1.7g

MgSO ₄ .2H ₂ O 3.7g

CaCl ₂ .2H ₂ O 4.4

CaCl ₂ .2H ₂ O吸濕性強，稱取隨時蓋蓋子。以上分別溶解，順序混合，因Ca易產生沉淀所以最后加入，可加熱助溶，定容至1000ml。

（2）微元素母液（1000倍）

KI 415mg

NaMoO ₄ .2H ₂ O 125mg

CuSo ₄ .5H ₂ O 12.5mg

CoCl ₂ .6H ₂ O 12.5mg

MnSO ₄ .7H ₂ O 11.15mg

ZnSO ₄ .7H ₂ O 4.3g

H ₃ BO ₃ 3.1g

最后定容至500ml