植物組織直接PCR

實驗概要

本實驗以擬南芥葉片為試材介紹了一個不用提取DNA直接進行PCR的簡單方法。

主要試劑

0.25N   NaOH

0.25N    HCl

NP-40緩沖液：0.5N Tris-HCI， pH8.0 ，25% NP-40

實驗步驟

1. 取面積約為lmm²的植物葉片放在500ul離心管中，加入40ul的0.25N NaOH，在沸水中煮30秒。

2. 取出小離心管，再加40ul 0.25N HCL和20ul 1 NP-40緩沖液(0.5N Tris-HCL， pH8.0 25%NP-40 )，沸水中煮2分鐘。

3. 室溫下于12000g離心1分鐘。棄上清。

4. 加入PCR反應混合液。

    5.0ul 10xPCR緩沖液(0.2M Tris-HCL， pH8.3， 15mM MgCL O. 5M KCL，1%明膠)

    5.0ul 10xd NTPs(2mM儲液)

    2.5ul引物1 (10pmol/l)

    2.5ul引物2 (10pmol/l)

    0.2ul Taq酶(l0u/ul)

    34.8ul雙蒸水。

5. 以50ul液體石蠟覆蓋。在PCR儀上進行反應。

6. 通過瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產物。