直接PCR(Direct PCR)使用未純化的樣本進行PCR擴增,無需核酸純化步驟,為DNA擴增帶來前所未有的便捷。如果您研究領域涉及基因分型、轉基因、質粒檢測、基因敲除分析、DNA來源鑒定、物種鑒定、SNP分析等,請看完下面的介紹吧。
直接PCR需要的試劑
樣本裂解液
樣本裂解液可自己配置,也可購置。不同品牌裂解液組份的差異,使得裂解能力各有不同,進而裂解時間稍有差異。比如動物組織樣本制備,一般推薦30min或過夜裂解,也有極少數裂解液可以將樣本制備時間縮短為5min。
PCR master mix
建議使用熱啟動DNA聚合酶,增強特異性擴增,擴增能力也更強。
清除或抑制樣本中影響DNA擴增的組份
對于較難處理的樣本,如植物和血液,含有較多的可以影響DNA聚合酶結構和活性的抑制劑組份,造成PCR擴增難以進行。針對這類樣本,處理樣本時需要加入可以清除或抑制樣本中影響DNA擴增的組份。

德國MACHEREY-NAGEL(MN)具有小鼠、血液、植物葉片和種子直接擴增PCR檢測試劑盒。
產品的整體理念為:
1. 快速:優化的裂解液組份,應對不同類型的樣本,比如小鼠毛發,植物的種子或堅硬的植物葉片等樣本;同時裂解樣本所需的時間最短,比如5min完成小鼠組織樣本制備。
2. 便捷:all in one形式試劑盒,包含了取樣工具、裂解液、抑制劑清除劑、PCR master mix、loading 染液等。
NO.1
NucleoType Mouse PCR
專為小鼠快速基因分型實驗設計,適用于剪碎的鼠尾(1mm)、耳號嵌取樣鼠耳(1mm ?)、鼠血(1μL)、毛皮(比如3–30 鼠毛)。
特點
1. 僅5分鐘完成DNA樣本的準備,也可不裂解樣本直接PCR反應;
2. 包含熱啟動的Master mix,擴增的核酸片段可達1000bp;
3. Loading染料包含其中,可直接進行后續的凝膠電泳。
流程

NO.2
NucleoType Blood PCR
用于各種來源全血(EDTA、檸檬酸鹽或肝素等抗凝劑處理)和血卡的血斑快速基因分析檢測。
特點
1.僅1min完成血液樣本的準備;
2.含有新型血液轉移工具,可以快速方便的將小份血液轉移到PCR mix里面;
3.內含的Inhibitor Removal Pearl,應對難處理的血液樣本;
4.包含熱啟動的Master mix,擴增的核酸片段可達1000bp;
5. Loading 染料包含其中,可直接進行后續的凝膠電泳。
流程

NO.3
NucleoType Plant PCR
適用于植物葉片快速簡單基因分型分析。
特點:
1.僅1分鐘完成植物葉片樣本的準備;
2.包含了ZL的植物樣本取樣工具Plant Transfer Tool(PTT);
3.PTT上面附有的特殊涂層可以讓植物材料中存在的PCR抑制劑在相當長的一段時間內失活;
4.樣本轉移到PCR mix之后,可以在4℃到37℃環境下存放2h,然后進行PCR循環反應;
5.包含熱啟動的Master mix,擴增的核酸片段可達1000bp;
6.Loading 染料包含其中,可直接進行后續的凝膠電泳。
流程

NO.4
NucleoType Seed PCR
用于植物種子或堅硬的植物材料快速基因分型實驗。
特點
1.僅5分鐘完成種子樣本的準備;
2.包含熱啟動的Master mix,擴增的核酸片段可達2000bp;
3.Loading 染料包含其中,可直接進行后續的凝膠電泳;
4.適用于堅硬的植物材料比如大豆、小麥、玉米、水稻等植物種子或苔蘚、蕨葉、樅葉等樣本。
流程

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