植物細胞組織培養

實驗概要

植物細胞和組織培養的技術性強，要求無菌操作，通過本實驗可初步掌握常規的組織培養技術，加深對無菌操作的了解。

實驗原理

植物的全能性：植物體的任何一個細胞都具有生長分化成為一個完整植株的能力，稱為植物的全能性。

植物組織培養就是利用植物的全能性進行離體無菌植物培養的一門技術。植物組織培養按其原始意義，就是指愈傷組織培養。但發展至今，其范圍日益擴大，已包括植物和它的離體器官、組織、細胞和原生質體的離體無菌培養。因此，擁有幾種不同水平的培養技術，即整體的、器官的、組織的、細胞的和原生質的培養技術。

本實驗選擇豌豆為材料，豌豆（Pisum sativum）屬豆科植物，是糧食、飼料和重要的蔬菜作物，也是遺傳學家和植物生理學家感興趣和樂于采用的實驗植物，豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體，皆可形成愈傷組織，其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養可包括小至十幾微米的莖尖分生組織（生長點）和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養。在實踐應用上，常采用生長點的培養使患病植物去病毒，以達到挽救優良品種，提高產量和質量之目的。

主要試劑

1. MS培養基，植物激素：NAA、6-BA等；

2. 飽和漂白粉液（次氯酸鈉）；

3. 70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

4. 無菌水 。

主要設備

1. 酒精燈、三角燒瓶、培養皿；

2. 鑷子、剪刀、剖針；

3. 雙筒解剖顯微鏡；

4. 光照培養箱或溫室。

實驗材料

煙草無菌苗、豌豆幼苗。

實驗步驟

豌豆苗的莖尖培養

1. 取發芽6天的豌豆幼苗10株，簡取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無菌）用無菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養皿中。

2. 在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝去幼葉露出生長錐，用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個葉原基的生長錐。

3. 將挑好的莖尖移到MS加10.7μmol/L萘乙酸(NAA)加4.4μmol/L 6-芐基腺嘌呤（6-BA）的培養基上誘導愈傷組織形成，用封口膜將培養皿封好。

4. 在恒溫培養箱中，26℃下,培養六周，形成愈傷組織，經繼代后，可用于生根培養。