植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察

一、實驗目的

了解細胞骨架的結構特征及其制備技術。

二、實驗原理

細胞骨架（cytoskeleton）是由蛋白質絲組成的復雜網狀結構，根據其組成成分和形態結構可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細胞形態的維持，細胞的生長、運動、分裂、分化，物質運輸，能量轉換，信息傳遞，基因表達等起到重要作用。當用適當濃度的Triton X-100處理細胞時，可將細胞質膜中和細胞質中的蛋白質和全部脂質被溶解抽提，但細胞骨架系統的蛋白質不受破壞而被保存，經用戊二醛固定，考馬斯亮藍 R250染色后，可在光學顯微鏡下觀察到由微絲組成的微絲束為網狀結構，就是細胞骨架。

三、實驗器材、藥品

材料：洋蔥鱗莖。

器材：普通光學顯微鏡、滴瓶、容量瓶、試劑瓶、燒杯、載玻片、蓋玻片、鑷子、小剪刀、吸水紙、擦鏡紙。

藥品：

（1）M緩沖液（加水定容到1000ml）

（2）磷酸緩沖液(pH 6.8)：0.2 mol／L 磷酸緩沖液，用NaHCO₃調至 pH6.8。

（3）1%Trion X-100：用M緩沖液配制.

（4）0.2％考馬斯亮藍R250：其溶劑為甲醇46.5ml，冰醋酸7ml，蒸餾水46.5ml。

（5）3%戊二醛：用0.2 mol／L磷酸緩沖液配。

四、實驗步驟

1.取洋蔥鱗莖切成大小約0.5cm2的塊狀，置磷酸緩沖液內浸泡3－10小時；

2.將浸泡后的鱗莖小塊移動到1％的Trion X-100中處理30min；

3.用M-緩沖液洗3次，每次5分鐘；

4.放入3％戊二醛中固定30分鐘；

5.磷酸緩沖液洗3次，每次2min；

6.考馬斯亮藍染色30分鐘；

7.水洗、鋪展、裝片、鏡檢。