植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)
Plant Proline Assay Kit with Ninhydrin
● 產品組成：
| 組分貨號 | 名稱 | 規格 | 貯存 |
| PP5040-01 | 試劑1-Pro裂解液 | 100 ml | RT |
| PP5040-02 | 試劑2-Pro標準液 | 1 ml | 4℃ |
| PP5040-03 | 試劑3-Pro顯色液 | 50 ml | RT 避光 |
● 產品簡介：
脯氨酸(Proline，Pro)是一種環狀的α-亞氨基酸，呈中性，等電點為6.30，易溶于水。在正常環境情況下脯氨酸含量較低，但在逆境下(旱、熱、冷、凍、鹽堿等)，脯氨酸常有明顯積累，即積累指數與植物的抗逆性有關。植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)檢測原理是脯氨酸與茚三酮共熱發生反應，能產生穩定的紅色產物，以分光光度計測定處吸光度，在一定范圍內顏色深淺(即吸光度)與脯氨酸濃度成正比。
該試劑盒不使用傳統的磺基水楊酸和甲苯等有害溶劑，經濟環保。
該試劑盒主要用于測定植物組織中的游離脯氨酸含量，不適用于動物及醫療樣品中脯氨酸的測定。
按照一次使用1 ml Pro顯色液計算，試劑盒可以使用50次。
● 自備材料：
植物根莖、葉子等；剪刀；螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔板；1ml玻璃比色皿；分光光度計或酶標儀；水浴鍋或干浴器；離心機
● 操作步驟：
1、 樣本處理：
取新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，剪碎，迅速稱取， 按照20mg重量加入1ml
Pro裂解液的比例加入Pro裂解液（建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管），沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻)，10000rpm離心
2分鐘，上清即為脯氨酸提取液，4℃保存備用。待測提取液如不能及時測定，應置于-20℃保存，1-2天內穩定。
2、 Pro顯色液的配制：
把小管裝的茚三酮粉末，全部加入到茚三酮溶解液中，劇烈混勻至完全溶解，即配成Pro顯色液。注意：Pro顯色液具有一定腐蝕性，請小心操作。
3、 配制系列脯氨酸標準溶液：
取1ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到裝有Pro標準液的小管中，混勻后徹底溶解，即配成的Pro標準液（100mg/ml）。
取1 μl 100mg/ml 標準液加入到1ml Pro裂解液中，即配成100μg/ml Pro標準液待用。參照下表配制1-6號不同濃度的Pro標準溶液。
| 編號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 100μg/ml Pro標準液加入量（ml） | 0.01 | 0.02 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.10 | 0.15 | 0.2 |
| Pro裂解液（ml） | 0.49 | 0.48 | 0.46 | 0.44 | 0.42 | 0.4 | 0.35 | 0.3 |
| 脯氨酸含量（μg） | 1 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 15 | 20 |
4、 樣品測定:
= 1 \* GB3 ① 分光光度計測定：參考下表設置反應混合液，依次加入試劑：
| 空白管 | 標準管 | 測定管 | |
| 試劑1-Pro裂解液 | 0.5 ml | - | - |
| 步驟1中的脯氨酸提取液 | - | - | 0.5 ml |
| Pro標準液（步驟3中1-8管） | - | 0.5 ml | - |
| 試劑3-Pro顯色液 | 1 ml | 1 ml | 1 ml |
= 2 \* GB3 ② 酶標儀測定：參考下表設置反應混合液，依次加入試劑：
| 空白管 | 標準管 | 測定管 | |
| 試劑1-Pro裂解液 | 50 μl | - | - |
| 步驟1中的脯氨酸提取液 | - | - | 50 μl |
| Pro標準液（步驟3中1-8管） | - | 50 μl | - |
| 試劑3-Pro顯色液 | 100 μl | 100 μl | 100 μl |
③ 水浴煮沸或干浴20分鐘，間歇混勻。加熱時務必注意避免液體暴沸濺出，可使用鎖蓋離心管或螺旋蓋離心管。
④ 冰浴或流水冷卻至室溫，10000 rpm離心 2分鐘，如發現沒有不溶物，也可以不離心。
⑤ 取上清，用空白管作為對照，用分光光度計或酶標儀檢測分別測定反應混合液520nm吸光度值。
5、 計算：
以系列脯氨酸標準(1-6號管)含量(μg)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，制作標準曲線，根據測定管的吸光度進而計算其脯氨酸含量。
植物組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=（C×VT）/(W×VS)
C=從標準曲線上查得的脯氨酸含量(μg)
VT=步驟1中脯氨酸提取液總體積(ml)
W=步驟1中使用的樣品鮮重(g)
VS=步驟4中測定時加入的脯氨酸提取液體積(ml)