植物DNA提取實驗

實驗方法原理 真核細胞基因組在提取過程中一般有以下幾步，首先是機械法破細胞抽提；然后去除蛋白質，糖類等細胞內雜質污染；最后純化出DNA。

實驗材料 幼嫩的植物材料

試劑、試劑盒 液氮CTAB抽提緩沖液NaACTris-HCl EDTA氯仿異戊醇TE buffer

儀器、耗材 瓷研缽離心管離心機

實驗步驟

一、實驗試劑及材料
 
1.  材料：幼嫩的植物材料0.5g左右。
 
2.  試劑：液氮，CTAB抽提緩沖液：2%CTAB(cetyl trimethyl ammonium bromide， 十六烷基三甲基溴化銨)，1%β-巰基乙醇 1.4mol/L Nacl，20mmol/L EDTA，100mmol/L Tris-Hcl pH8.0，3M NaAC，50mM Tris-HCl pH8.0，20mM EDTA，氯仿：異戊醇（24:1），異丙醇 ，70％乙醇，TE buffer。
 
二、實驗方法
 
1.  取0.5 g植物材料，雙蒸水洗凈，并用濾紙吸干。
 
2.  植物材料剪成1 cm左右碎片，放入預冷的瓷研缽中。
 
3.  加入液氮速冷，研磨成細粉（越細越好）。
 
4.  在5 ml離心管中加入抽提緩沖液2.5 mll，60℃保溫1小時。
 
5.  15 000 rpm，離心10分鐘。上清轉入另一個新的離心管中。
 
6.  加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），混勻抽提至水乳膠融狀。
 
7. 15 000 rpm，離心10分鐘。
 
8.  上清轉入另一個新的離心管中。
 
9.  加入2/3倍體積預冷異丙醇，-20℃保溫30 min-1 h，緩緩混勻DNA成絮狀折出。
 
10.  15 000 rpm，離心10分鐘，棄上清。
 
11.  DNA沉淀用 70％乙醇洗2次。
 
12.  加入400 μl TE buffer溶解DNA。
 

注意事項

1.  真核細胞基因組較大，在操作中應注意動作輕柔，且在低溫下進行，以最大限度地減少機械和化學作用對DNA的剪切，從而獲得相對完整的DNA。