植物miRNA及piRNA的逆轉錄

miRNA在植物的發育、抗病、和應激反應中發揮著重要作用。一般認為，這些小的非編碼RNA通過靶向mRNA剪切，在后轉錄水平調節植物的基因表達。這些基因表達中的靶向變化由數百個成熟miRNA的差異表達所調控，每個成熟miRNA結合在靶mRNA的特定序列上。因此，對植物的成熟miRNA調控和表達進行分析，能夠為植物的組織發育、干旱保護及疾病防御機理提供寶貴信息。目前基本無法通過qRT-PCR對植物的成熟miRNA進行分析，由于植物miRNA的特性，基于多聚腺苷酸的逆轉錄反應對其反應效率十分低下。QIAGEN推出了獨特的解決方案，能夠對植物組織中的成熟miRNA進行通用的逆轉錄反應。

QIAGEN miScript Plant RT Kit用于植物miRNA和其他3’端修飾的小RNA的cDNA合成；是針對具有3’端甲基化(2’-O-Me)修飾的小RNA進行無偏差 cDNA合成的通用型試劑盒。本試劑盒專為基于實時定量PCR技術的小RNA表達分析應用設計和優化，能夠配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay等產品使用。這一類通過功能驗證的分析和芯片產品可應用于水稻、玉米、大豆、煙草和其他一些重要農業作物的檢測，以及植物學相關的研究。在3’末端堿基具有2’-O-Me甲基化修飾的小RNA（如植物成熟miRNA和piwi互作RNA (piRNA)）中，一般不具有poly A尾結構，因此無法通過多聚腺苷酸依賴的cDNA合成方法有效地反轉錄。專用的miScript Plant RT Kit通過首先向植物miRNA的3’末端連接一個接頭解決了這一難題。不同于多聚腺苷酸化，這一鏈接反應不會受到植物miRNA 3’末端堿基上存在的2’-O-Me甲基化修飾的負面抑制。接頭一旦連接成功，即可實現反轉錄反應。

性能

miScript Plant RT Kit與miScript Plant qPCR System的聯合使用，能夠確保針對植物樣本實現靈敏和特異性的miRNA檢測和定量工作。由于許多miRNA表達豐度很低，因此檢測靈敏度對于確保獲得可靠數據至關重要。miScript Plant qPCR System能夠提供優異的靈敏度，寬廣的動態監測范圍，以及始終如一的高擴增效率。miScript Plant qPCR System的良好性能將幫助您于首次嘗試時，即在技術重復和生物重復樣本之間獲得高度可重復的結果。

操作流程

反轉錄反應可方便地進行。通常在連接反應介導的反轉錄反應中，一般使用含有3’端2’-O-Me修飾小RNA的總RNA做為起始材料。反轉錄是一個簡單直接的操作步驟，包含了37℃下1小時的溫育反應，以及之后在95℃下通過短暫孵育對反應進行失活。

應用

miScript Plant RT Kit通常做為miScript Plant PCR System的一部分，用于進行： 

• 植物成熟miRNA的定量和表達譜分析

• piRNA的定量和表達譜分析