實驗材料：
1.完整的人角膜；
2.GMF-Saline G；
3.中性蛋白酶Ⅱ，1.2U/ml（用DMEM/F12/GA稀釋2.4U中性蛋白酶Ⅱ）；
4.胰蛋白酶/EDTA；
5.DMEM/F12/GA；
6.DEME/F12/2FB/GA：DMEM/F12/GA含2%F；
7.CMF/GA；
8.LSC培養基；
9.彎虹膜剪，11cm（4-3/8in）；
10.Jeweler&rsquo鑷，10cm（4in）；
11.角膜剪，19mm刃，尖頭；
12.Colibri縫紉鉗，0.1mm；
實驗方法：
1.清洗角膜3&time5min；
2.剪除殘留的鞏膜，結膜和虹膜；
3.加入2ml中性蛋白酶Ⅱ，4℃過夜，輕微攪動；
4.將加入中性蛋白酶Ⅱ的角膜放入4℃搖床搖30min；
5.用DMEM/F12/GA清洗角膜；
6.解剖顯微鏡下，小心去除角膜中央的上皮細胞（此時多數的中央上皮細胞已經剝脫）并除去角膜緣包含有Vogt柵欄區的色素上皮細胞；
7.用胰蛋白酶/EDTA消化角膜緣上皮細胞片37℃，10min；
8.加入等體積DMEM/F12/2FB/GA；
9.400g離心10min，棄上清；
10.用DMEM/F12/2FB/GA洗一遍，離心，棄上清；
11.加入LSC培養基，將細胞拍散并用血細胞計數板計數；
12.將細胞以1&time104/cm2的密度接種至鋪有3T3飼養層的組織培養皿或準備好的人羊膜上；
13.每三天更換一次培養基；
14.當細胞達90%匯合時用胰蛋白酶消化傳代。