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  • 發布時間:2020-09-14 21:55 原文鏈接: 正常人骨間充質干細胞的培養


    實驗材料:

    1. 骨髓來源:骨髓材料由健康人提供;

    2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1&time,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;

    3. 分離液:密度為1.073g/ml的Percoll溶液;

    4. DMEM-LG培養液:含1000mg/L葡萄糖的DMEM培養液,補充10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml;

    5. 消化液:為0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA混合消化液;



    實驗方法:

    1. 由臨床醫生抽取健康人骨髓。加肝素抗凝;

    2. 取25ml肝素化骨髓與等體積的混合,用吸管吹打分散細胞。在室溫下離心(900g,10min)。棄上清液;

    3. 加入懸浮細胞,調節細胞密度至4&time107個/ml;

    4. 在離心管中先加入1.073g/ml的Percoll溶液,再將5ml細胞懸液鋪于其上。離心(900g,30min);

    5. 收集界面上的細胞,加入DMEM-LG培養液清洗。離心,收集細胞;

    6. 用DMEM-LG培養液重新懸浮細胞,計數細胞,調節細胞密度;

    7. 將細胞以1.6&time105個/cm2的密度接種于培養瓶中。在37℃、5%CO2飽和濕度的CO2培養箱中培養。48h后換液,以后每3—4d換液1次;

    8. 當培養的細胞相互匯合達到90%的生長表面時,用0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA液消化分散細胞。進行繼代培養。

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