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  • 發布時間:2020-07-13 15:26 原文鏈接: 正常角膜緣干細胞的免疫染色實驗

    正常角膜緣干細胞的免疫染色

    試劑和材料:
    1. 一抗:
    (1) ABCG2-----------------小鼠單克隆BXP-21---------1:100
    (2) 連接蛋白-43-----------兔多克隆CX43-------------1:100
    (3) 細胞角蛋白3(K3)-----小鼠單克隆AE5----------- 1:500
    (4) 細胞角蛋白12(K12)---兔多克隆J7-------------- 1:200
    2. 二抗;
    (1) 抗小鼠IgG-------------Alexa-488----------------1:2500
    (2) 抗兔IgG---------------Alexa-546----------------1:1500
    3. 封閉抗體:PBSA配制的10%熱滅活羊血清;
    4. Trion X-100;
    5. PBSA;
    6. 多聚甲醛(PFA),將16%原液用PBSA現配成4%的工作濃度;
    7. Immu-Mount防褪色封片劑;
    8. 載玻片和#1蓋玻片;
    9. 共聚焦顯微鏡;

    實驗方法:
    1. 培養在塑料平皿或羊膜上的細胞;
    2. CMF-Saline G洗一遍;
    3. 用新鮮配制的4% PFA室溫固定15min;
    4. PBSA洗一遍;
    5. 0.1% Triton X-100破膜10min;
    6. 樣本與一抗室溫孵育1h;
    7. PBSA洗2遍;
    8. 加入二抗室溫孵育1h;
    9. 用PBSA洗2遍;
    10. #1蓋玻片,用最小體積的防褪色的封片劑封片;
    11. 在熒光或共聚焦顯微鏡下用40×油鏡對樣本進行觀察


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