毛細管電泳法分析單鏈構象多態性實驗（三）

PCR 產物5% 非變性引物

10 X 基因分析儀緩沖劑Milli-Q 級別的超純水

ABI PRISM 3100 基因分析儀基因掃描毛細管芯片

1.安裝一個 16 通道的芯片（50 cmi.d.) 使之與探頭距離 36 cm。根據制造商說明書將設備做好正常運行的準備。吸管內吸入 5% 非變性引物，在緩沖腔內注人 IX 基因分析儀緩沖劑。準備樣品板。將管放入樣本槽。

2.在 18°C、25°C 和 35°C 運用三種運行組件運行毛細管電泳，使用以下參數。

加入時間：IOs

加入電壓：3kV

運行電壓：53kV

運行時間：25 min

使用設置為 D 的濾光鏡檢測 FAM、HEX、ROX 指示。

3.根據制造商說明書使用基因掃描分析軟件分析結果。對每一個電泳溫度設定一個大小標準。這些標準里的峰值是由掃描點除以 10 來確定的（掃描點為 3550 的峰值是 355)。使用 DNA 固有的大小標準來校準這些峰值。將未知樣本與具有已知 DNA 序列的正常樣本比較。另外也可以根據制造商說明書使用基因分型軟件執行自動化數據分析。

4.用未標記的引物再次放大具有分離的峰值或異常的色移的樣本，并且通過 DNA 測序檢測突變（單元 7.5)。