4 研究進展
4.1 柱制備 在CEC中，柱制備是很重要的環節，因為柱性能，如柱重復性、柱壽命、柱效等，是實際應用時最關鍵、最基礎的指標。常用方法是柱內填充固定相顆粒，即填充電色譜柱，主要方式有勻漿填充制備法、拉伸填充制備法、電動填充法。填充柱的柱容量大，但塞子效應、氣泡、填充均勻度也是無法回避的問題。近來發展的開管電色譜柱［17,24］和連續床電色譜柱［13,21,23］有望解決這些不足。
4.2 梯度洗脫［15,25,37,38］ Behnke等［37］首次在PEC中利用壓力驅動實現了CEC系統溶劑的梯度洗脫，不僅大大縮短了分析時間，而且分離的柱效和分辨率均有顯著提高，因而能達到梯度模式色譜的高選擇性和電泳分離的高效性。Yan等［38］利用計算機控制電壓系統，對CEC實現了溶劑的梯度洗脫，可避免HPLC梯度洗脫系統的流體脈動和可壓縮性，保證實驗數據的準確性和可靠性。
4.3 CEC-MS偶聯技術［40,41］ 通過CEC-MS聯用可以充分發揮2種方法的優勢，進一步進行定性和定量分析，特別對難以分析的復雜組分有重要意義。1995年，Lord等［40］首先實現了CEC-MS偶聯，分離了用其它方法難以分離的染料。最近，Wu［16,17］以及Ding等［18］將CEC與MS聯用分析蛋白、肽、DNA等生物大分子，獲得較理想結果。
5 在藥物分析中的應用
目前CEC主要用于包括多環芳烴在內的芳香族化合物、染料、蛋白、肽、寡聚核苷酸、氨基酸、對映體等，在藥物分析中的應用逐漸增加。對于疏水性強的樣品或電泳淌度相近的離子化合物、對映體，CEC體現出強大的分離能力，并在分析速度、重現性、檢測限、定量方面達到了應用的要求［42］。
5.1 手性分離 CEC進行手性藥物對映體拆分主要有3種方式:(1)非手性固定相結合手性添加劑流動相，手性選擇作用依靠流動相中添加的手性選擇劑產生［3］。(2)手性固定相［3,43～46］,固定相上鍵合手性選擇劑，如環糊精、蛋白等。(3)手性分子烙印固定相［12,19］，進行記憶性、專一性手性分離。Mayer等［46］在50 μm開管柱內壁涂布鍵合了γ-CD或β-CD的二甲基聚硅氧烷，在中性條件下，較好地分離了NSAIDs(布洛芬、氟聯苯丙酸、芴丙酸、乙哚乙酸）和1-苯乙醇的對映體。Lelievre等［3］用填充法分別制備3 μm ODS普通電色譜柱和5 μm鍵合HP-β-CD的硅膠顆粒手性電色譜柱，進行了手性固定相和非手性固定相手性分離的比較，在拆分氯噻酮時，手性固定相方式顯示出分離時間短、高選擇性和高分辨率的優勢。另外，Li等［43］用β-CD手性固定相拆分了環己巴比妥、安息香、脫氧核糖蛋白(DNP)-蛋氨酸、DNP-乙硫氨酸和DNP-正亮氨酸的對映體。Li等［44］用鍵合α1-酸性糖蛋白的手性固定相電色譜柱分離了環己巴比妥、安息香、戊巴比妥、異環磷酰胺、環磷酰胺、雙異丙吡胺、美多心安、心得安、心得平和心得舒，并考察了pH、電解質濃度、有機溶劑濃度對保留和手性選擇性的影響。Lloyd等［45］在固定相上鍵合了人血清白蛋白，拆分了安息香、羥基安定。最近，分子烙印技術已開始引用于手性分離，Schweitz等［19］在毛細管柱內填充含有功能性單體、交聯劑、烙印分子(如R-心得安、S-美多心安)的聚合物，使其具有單一的記憶特性，可用于相應手性藥物的快速分離，如在120 s內可使心得安、美多心安對映體達到基線分離。
5.2 復雜成分分析 復雜成分分析，特別是分子結構相近或電泳淌度接近的混合成分的分離是比較困難，也是非常重要的。近年來CEC在這方面展示了良好的應用前景，Taylor等［15］利用梯度洗脫電色譜較好地分析了生物體液中皮質醇類化合物，在加電壓的同時施加1.2 MPa氣壓，實施加壓電色譜并梯度洗脫，生物體液中腎上腺甾酮、氫化可的松、地塞米松、氟考龍等能在較短時間內很好地分離，當樣品預處理后，連續進樣200次都能獲得良好的分析結果。同樣地，Taylor等［33］利用梯度洗脫電色譜結合電噴霧離子質譜檢測，分離了苯二氮類(安定、硝基安定)、皮質醇類(去炎松、氫化可的松、潑尼松、可的松、甲強龍、倍他米松、地塞米松、腎上腺甾酮、氟考龍、丙米松)和噻嗪類利尿劑(甲苯喹唑酮、氟硫噻嗪、雙氫氟噻嗪、芐氟噻嗪、甲氯噻嗪)等藥物。
Smith等［9,11］先用ODS反相電色譜柱分析了甾類化合物Fluticasone propionate及其含有的雜質，在提高流動相pH和有機溶劑乙腈濃度后，分析時間明顯縮短，并在相近的條件下分析了前列腺素以及合成的中間體和其它雜質，還較好地分離了頭孢氨呋肟的非對映異構體。為了更好地分離強極性或帶電組分，達到快速高效，用強陽離子交換樹脂替代ODS填料，對三環類抗抑郁劑(丙咪嗪、阿米替林、去甲丙咪嗪、去甲替林、甲吡咯嗪、氯丙嗪、芐氟噻嗪)進行分析，獲得8×106.m-1理論塔板數，并有效地改善了峰形。Eimer等［47］采用加壓電色譜，15 min內分離了抗癲癇藥物及其代謝物(ethosuccinimid、撲癇酮、環氧卡馬西平、10,11-二羥卡馬西平、苯妥英、卡馬西平)，10 min內分離了β-受體激動劑(特布他林、酚丙喘寧、克喘素)，還考察了電壓、附加壓力大小對分離效率和保留時間的影響。作者認為，在加壓下可以降低流動相pH，不需要過多考慮電滲流的損失。Euerby等［42］全面考察了電色譜系統的電壓、溫控、樣品進樣量、有機溶劑等因素對藥物分析的影響，較好地分離了tipredane的非對映異構體，并有很好的重現性，可以達到定量分析的要求。
最近，Lord等［48］采用梯度電色譜柱結合電噴霧離子質譜檢測，分析了異羥洋地黃毒苷元、羥基洋地黃毒苷元、華蟾蜍它靈、洋地黃毒苷元、華蟾蜍精、蟾蜍靈等甾類化合物。魏偉等［27］用離子交換電色譜分離鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、鹽酸小檗堿等生物堿類成分，斑允東［49］嘗試用CEC分離中藥復雜成分人參皂苷，開始了CEC在中藥復雜成分分析中的應用研究。
6 前景展望
80年代以來，HPLC和CE已在分析領域發揮了很大作用，而同時具備HPLC和CE兩者優勢的CEC，隨著其分離機制的不斷探索，柱制備技術的研究和完善，各種分離模式的發展，新型專用電色譜儀器的研制，可充分發揮CEC高效快速［50］、選擇性強、穩定性好［51］、靈敏度高、樣品用量小、流動相消耗少和自動化的優點。通過CEC-MS聯用，CEC梯度洗脫，CEC配合DAD、LIF等檢測技術，相信CEC作為一種強有力的新興分析手段，必將在藥物分析，特別是在蛋白、多肽類［52,23］藥物和中藥復雜成分的定性和定量分析中發揮很大作用。
作者單位：中國科學院大連化學物理研究所國家色譜研究分析中心 大連 116011
參考文獻