內標法給人的印象總是讓人頭疼,何時選用內標法,如何選擇內標物質,結果怎么計算,公式該如何理解,都是問題。
被問到過內標法的定量依據是什么,也就是在內標法里內標和待測物之間是什么關系。當時有點暈,說待測物和內標的比是一定的。到底是什么的比一定呢?你清楚嗎?
在此,撇開大家談論過很多的內標法如何應用的問題,來談談內標法的計算。
先來分清兩個概念,絕對校正因子和相對校正因子。以色譜分析為例,絕對校正因子是單位峰面積所相當的物質量,fi’=mi/Ai。而相對校正因子是某一組分與標準物質的絕對校正因子之比,f= fi′/ fs′=As?mi/Ai?ms。在內標法中,絕對校正因子主要由儀器的靈敏度決定,并且不易準確測量,也無法將內標物和待測物聯系起來;而相對校正因子才是定量的基礎,也是前文中提及的問題的答案,相對校正因子是那個一定的量,所謂待測物與內標的比一定也就是說待測物的質量與峰面積之比(即絕對校正因子 fi’)和內標物的質量和峰面積之比(fs’)的比值一定(話比較繞,結合公式就一目了然啦)。文獻上,標準上看到的校正因子也都是相對校正因子。相對校正因子也可以通過已知量的標準和內標混合后經實驗測定獲得。
對相對校正因子的公式進行簡單變形,就能夠得到待測物質量mi=Aifi’/Asfs’*ms=,進而通過C=mi/m得到待測物的濃度。
因此,再見到各類內標計算公式,我們就能夠分辨其中的f到底是相對校正因子還是絕對校正因子了。比如里,fi、 fs就是指絕對校正因子。
而為了避免測定校正因子,常采用內標標準曲線法。它以mi= ms*fi*Ai /(fsAs) 為基礎,但有一個前提是加入恒定量的內標物,且進樣量相同(ms同),這樣待測組分的含量就與Ai/As成正比了。mi=Ai/As*常數。
繪制內標標準曲線,先將待測組分的純物質配成不同濃度的標準溶液,分別取一定量的標準溶液,加入相同量的內標物,混合后進樣分析,測出Ai和As,以 Ai/As為縱坐標,以標準溶液的濃度為橫坐標作圖。分析待測試樣,取與標準溶液相同量的待測試樣和內標物,測出峰面積比,由標準曲線即可查出待測組分的含量。
利用內標標準曲線法定量,可以免去測定校正因子的麻煩,也可以減少與查閱到的校正因子儀器條件等不同造成的差異,適用于液體試樣的常規分析。
總結起來有2點。一是在內標法中只有相對校正因子,也就是待測物與內標物的絕對校正因子的比值是一定的。二是內標標準曲線法能夠避免測定校正因子,但使用上有一些限制。
內標法是結合了峰面積歸一法和外標法的優點的一種方法,它在加入內標物后,按峰面積歸一法的分析方法進行分析,這就避免了由于進樣的一致性及樣品歧視效應導致的偶然誤差。因而,它的分析精密度也是比較高的,是一種......
1、能與被測物及其他峰良好分開2、與被測物有相似的保留值(k)3、原樣品中不應存在4、在樣品制備步驟中與被測物性質極相似5、化學性質上不必與被測物相似6、可得到高純度的商品7、穩定,不與樣品及流動相發......
采用內標法定量時,內標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說,內標物應當是一個能得到純樣的已知化合物,這樣它能以準確、已知的量加到樣品中去,它應當和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學性質......