方法：
1. 潮氣呼吸法(連續吸入法)：
(1)試劑的制備：氯化乙酰甲膽堿用生理鹽水稀釋，按濃度0.03mg/ml-16mg/ml，倍倍遞增稀釋，4℃保存備用。用前需在室溫下放置30min。
(2)準備好試驗用儀器、設備和搶救用設備、藥品。受試者試驗前停用支氣管擴張藥，茶堿類、β2-受體興奮劑或抗膽堿藥物停用12h，抗組胺藥物停用48h，皮質激素口服停用24h，吸入治療停用12h。
(3)受試者戴有孔面罩，并與霧化器出口銜接，霧化器的入口應與壓縮空氣泵或氧氣瓶銜接，氣源壓力為3.5kgf/cm2，流量為5L/min-7L/min。
(4)試驗前受試者休息15min，先測一秒鐘用力呼氣容積(FEV1)值兩次，取最高值作為基礎對照。
(5)在霧化器內盛入5ml生理鹽水霧化，潮氣呼吸，吸入生理鹽水2min停止。測FEV1并與基礎值比較，降低不到10%，繼續進行藥物試驗，如果降低10%以上，休息5min再吸入生理鹽水，重測FEV1，如結果與上次相同，表明稀釋劑本身可增加氣道反應性，不再進行藥物試驗。
(6)藥物試驗：如果吸入生理鹽水氣道無反應，則從最低濃度開始順次吸入乙酰甲膽堿，潮氣呼吸，每一濃度吸2min，吸完后測FEV1等指標，直至FEV1較對照下降≥20%為止。
2. 計量法(間斷吸入法)：
(1)試劑制備、儀器準備，受試者試驗前的準備同潮氣呼吸法。
(2)采用Devibiss：N.40霧化器，對氣溶膠排出量加以校準，每撳平均排放量0.003 ml。一次試驗用五個霧化器，分別加入生理鹽水和四級不同濃度的藥液。乙酰甲膽堿濃度為：3.125、6.25、25、50mg/ml。
(3)同方法一第3項內容。
(4)霧化器口含管放置受試驗者上、下牙齒之間，并戴鼻夾。先吸生理鹽水，呼吸三次，由平靜呼氣末(功能殘氣位)開始緩緩吸氣1s-2s至肺總量，屏氣3s后呼氣，吸氣開始由試者手控霧化器皮球，給生理鹽水一撳。60s后測FEV1兩次(差值須100m1)，記錄其高值。
(5)按表順序依次吸入藥物(方法同上)，每一劑量吸完后，測FEV1指標，立即再吸下一劑量，直至FEV1較吸入生理鹽水后FEV1降低20%或達到最高劑量，試驗終止。吸入支氣管擴張藥物。
(6)FEV1下降百分率計算公式：(基礎FEV1-吸藥后最高FEV1)/基礎FEV1×100%。
(7)繪制劑量反映曲線圖，并在圖中確定FEV1下降20%所需的藥物濃度。
說明：縱坐標為FEV1 (%基礎對照值)，橫坐標為吸入藥物濃度。a代表正常人曲線，b代表哮喘患者曲線。
結果判定 ：
以FEV1較基礎對照值下降20%所需激發藥物的濃度(PC20FEV1)或含量(PD20FEV1)來判定試驗結果。乙酰甲膽堿PC20，FEV18mg/ml或PD20FEV112.8μmol為試驗陽性，大于上述數值為試驗陰性。