如果水體被污染,則有可能也被腸道病原菌(沙門菌、志賀菌、弧菌、腸道病毒等)污染而引起腸道傳染病。由于腸道病原微生物在水中數量很少,故從水體特別是飲用水中分離病原菌非常困難。大腸菌群是腸道好氧菌中最普遍和數量最多的一類細菌,所以常將其作為糞便污染的指示菌,即根據水中大腸菌群的數目來判斷水源是否受糞便污染。目前,世界各國一般認為大腸菌群是指示水質受糞便污染較好的指示菌,我國水質控制也采用大腸菌群作為指示菌。根據我國多年供水實踐,同時確保在流行病學上的安全,飲用水標準限值為每100mL中不得檢出。
總大腸菌群的檢驗方法有兩種:一種是多管發酵法可適于各種水樣、底泥,但操作較復雜,需時間較長;另一種是濾膜法,主要適用于雜質較少的樣品,操作較簡單快速,特別適用于自來水廠作為常規檢測之用。
(1)多管發酵法,多管發酵法是根據大腸菌群能發酵乳糖而產酸產氣的特性進行檢驗的。
多管發酵時所用的培養基是乳糖蛋白胨培養液。即將蛋白胨、乳糖、牛肉膏、鹽加熱溶解在一定量的蒸餾水中,調整pH值到7.2~7.4。再加1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL,充分混勻,分裝于置有倒管的試管中。滅菌,冷藏備用。設計依單眠為發酵時,以無菌操作方法將10mL水樣加入盛有培養液的試管中,混勻后置于37℃恒溫培養箱中培養24h。將發酵后的發酵管接種于品紅亞硫酸鈉培養基(蛋白胨、乳糖、磷酸氫二鉀、瓊脂、無水亞硫酸鈉、堿性品紅乙醇溶液加一定量蒸餾水制成),再置于37℃恒溫箱內培養18~24h,挑選符合下列特征的菌落:紫紅色,具有金屬光澤的菌落;深紅色,不帶或略帶金屬光澤的菌落;淡紅色,中心色較深的菌落。
取菌落的一小部分進行涂片,革蘭染色,鏡檢。
凡系革蘭染色陰性的無芽孢桿菌,再接種于普通的乳糖蛋白胨培養液中(內有倒管)經37℃恒溫培養24h,有產酸產氣現象,即判定為大腸菌群陽性。
(2)濾膜法將水樣注入已滅菌的放有微孔濾膜(孔徑0.45μm)的濾器中,經過抽濾,細菌即被截留在膜上,然后將濾膜貼于品紅亞硫酸鈉培養基上,進行培養。再計數與鑒定濾膜上生長的大腸菌群,計算出每1L水樣中含有的大腸菌群數。如有必要,對可疑菌落應進行涂片染色鏡檢,并再接種乳糖發酵管做進一步鑒定。
濾膜法具有高度的再現性,可用于檢驗體積較大的水樣,比多管發酵法能更快地獲得肯定的結果。不過在檢驗渾濁度高、非大腸桿菌類細菌密度大的水樣時,有其局限性。
對水中大腸菌群數與病毒檢出率之間的關系進行了研究,發現水樣中大腸菌群數越多,水樣的病原微生物陽性檢出率相應越高,具體關系列于表中。
