實驗概要
貝類等多糖,在沸水中加熱后被水浸提而逐漸滲出,多糖在弄硫酸作用下生成醛酮類物質,當遇到顯色劑苯酚時,發生顯色反應,同時顏色與糖的濃度呈現很好的線性關系,在490納米下測定吸光值,利用標準葡萄糖溶液可知貝類中多糖的含量。
實驗原理
貝類等多糖,在沸水中加熱后被水浸提而逐漸滲出,多糖在弄硫酸作用下生成醛酮類物質,當遇到顯色劑苯酚時,發生顯色反應,同時顏色與糖的濃度呈現很好的線性關系,在490納米下測定吸光值,利用標準葡萄糖溶液可知貝類中多糖的含量。
主要試劑
濃硫酸(98%);5%苯酚(棕色瓶4℃保存);蒸餾水;標準葡糖糖溶液;
主要設備
電爐;燒杯;移液槍(1000μL);試管(10個左右,具膠塞或顯色管);試管架;723紫外分光光度計;棕色容量瓶;100mL容量瓶;
實驗材料
葡萄糖;苯酚(使用時80℃水浴溶解后吸取,使用后放置冰箱中4℃保存);粗提糖液;濃硫酸;
實驗步驟
標準曲線的繪制
α---標準溶液配制與顯色:準確稱取50mg于105℃烘干(4h左右)的葡萄糖,定容于500mL容量瓶中,分別取1.0mL、1.2mL……2mL的葡萄糖溶液加入顯色管中,同時補水至2.0mL,搖勻后,用移液槍分別加入1mL
5%的苯酚溶液,迅速搖勻,后用10mL移液管(最好為鼓泡型)移取5mL濃硫酸(沿壁旋轉加入),迅速搖勻,蓋上塞子后放置室溫待用;
β---顯色:將葡萄糖溶液在490nm下在紫外分光光度計下測定OD值,以2mL水作為空白調零;
γ---原料測定
將冷凍肉制品冷卻流水解凍后,沖洗干凈后用濾紙吸干表面水分,后均勻選取用剪刀充分剪碎,不出現大塊肉粒
用電子分析天平準確稱量1g左右的樣品,精確至0.0001;
將稱好的樣品放入研缽中充分研磨,至無大塊肉粒,用水清洗干凈后放入燒杯中,以50mL水計,煮沸30min;水可隨時補充;
結束后將液體倒入離心管,同時剩余大塊煮沸肉粒重復C步驟,至浸提完全;
離心機中5000轉20min離心取上清液;
將上清液定容至100mL容量瓶放入4℃環境中保存;
按照葡萄糖測定的方法,根據原料情況分別取200μL至600μL的糖浸提液,測定吸光值
以標準方程計算含糖量
注意事項
苯酚應用80℃水浴溶解,苯酚有毒易揮發,做好防護措施;
原料處理時應盡可能均勻,同時不能有多塊存在,浸提時應多次浸提;
添加濃硫酸時應沿壁旋轉倒入,同時應迅速搖勻,以便顯色均勻
顯色后放置放至室溫左右測定,時間最好在30min以上