一、目的與要求：
1、掌握2．6-二氯酚靛酚測定維生素C的原理和方法。
二、原理：
還原型抗壞血酸能還原染料2.6-二氯酚靛酚，該染料在酸性中呈紅色，被還原后紅色消失。還原型抗壞血酸還原2.6-二氯酚靛酚后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質干擾時，一定量的樣品提取液還原標準2.6-二氯酚靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。
反應式如下：
還原型抗壞血酸染料(粉紅色)脫氫型抗壞血酸染料(無色)
三、試劑：
(1)2％草酸溶液：溶解20克草酸結晶于200毫升水中，然后稀釋至1000ml。
(2)1％草酸溶液：取上述2％草酸溶液500ml，用水稀釋至1000m1。
(3)抗壞血酸標準溶液：準確稱取20mg抗壞血酸，溶于1％草酸溶液中，移入lOml量瓶中，并用1％草酸溶液稀釋至100毫升，混勻，置冰箱中保存。
使用時吸取上述抗壞血酸5ml，置于50毫升容量瓶中，用1％草酸溶液定容之。此標準使用液每毫升含0.02mg維生素C。
標定：吸取標準使用液5m1于三角燒瓶中，加入6％碘化鉀溶液0.5ml，1％淀粉溶液3滴，再以0.001N碘酸鉀標準溶液滴定，終點為淡藍色。
計算如下：
抗壞血酸濃度（mg/ml）=( V1×0.088)/V2
V1：滴定時所耗0.001N碘酸鉀標準溶液的量(ml)
V2：所取抗壞血酸的量(ml)
0.088：lml O.0001N碘酸鉀標準溶液相當于抗壞血酸的量(mg／m1)
(4)2.6：二氯靛酚溶液：稱取碳酸氫鈉52mg，溶于200ml沸水中，然后稱取2.6-二氯靛酚50mg，溶解在上述碳酸氫鈉的溶液中，待冷，置于冰箱中過夜，次日過濾置于250ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。此液應貯于棕色瓶中并冷藏，每星期至少標定1次。
標定方法：取5m1已知濃度的抗壞血酸標準溶液，加入1％草酸溶液5ml，搖勻，用上述配制的染料溶液滴定至溶液呈粉紅色于15秒不褪色為止
每毫升染料溶液相當于Vc的毫克數=滴定度(T)=(C×V1)/V2
式中：
C；抗壞血酸(V)的濃度(mg／m1)
Vl：抗壞血酸的量(m1)
V2：消耗染料溶液量(m1)
(5)0.1N碘酸鉀溶液：精確取干燥的碘酸鉀0.100ml。0.3567克用水稀釋至100ml.
(6)0.001N碘酸鉀溶液：吸取0.1N碘酸鉀溶液1ml，用水稀釋至100毫升。此溶液1ml相當于抗壞血酸0.088mg。
(7)1％淀粉溶液。
(8)6％碘化鉀溶液。
四、操作方法：
1、稱取適量(50.0-100.0克)樣品，加等量的2％草酸溶液，倒入組織搗碎機中搗成勻漿。稱取10.00-30.00克漿狀樣品(使其含有抗壞血酸1-5mg)，置于小燒杯中，用1％草酸溶液將樣品移入100毫升容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。
2、將樣液過濾，棄去最初毫升濾液。若樣液具有顏色，用白陶土(應選擇脫色力強但對抗壞血酸無損失的白陶土)去色，然后迅速吸取5-lOml濾液，置于50ml三角燒瓶中，用標定的2.6-二氯靛酚染料溶液滴定之,直至溶液呈粉紅色于15秒內不褪色為止。
計算：
每百克樣品中抗壞血酸毫克數＝(V .T)/W×100
V：滴定時所耗去染料溶液的量(ml)；
T：lml染料溶液相當于抗壞血酸標準溶液的量(mg)
W：滴定時所取的濾液中含樣品量(g)．
五、說明：
(1)所有試劑配制最好用重蒸餾水。
(2)樣品取樣后，應浸泡在已知量2％草酸溶液中使抗壞血酸受損失。以免發生氧化，使抗壞血酸受損失。
(3)對動性的樣品可用10％三氯醋酸代替2％草酸溶液提取；對含有大量Fe的樣品，如儲藏過久的罐頭食品可用8％醋酸溶液代替草酸溶液提取。
(4)整個操作過程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。
(5)若樣品濾液無色，可不加色陶土。須加白陶土的，要對每批新的白陶土測定回收率。加白陶土脫色過濾后，樣品要迅速滴定。
(6)滴定開始時，染料溶液要迅速加入，直至紅色不立即消失而后盡可能一滴一滴地加入，并要不斷振動三角燒瓶，直至呈粉紅色于15秒內不消失為止。樣品中可能有其他雜質也能還原2.6-二氯靛酚，但一般雜質還原該染料的速度均較抗壞血酸慢，所以滴定時以15秒鐘紅色不褪為終點。
(7)測定樣品溶液時必須同時作一空白對照，樣品溶液滴定的毫升數須扣除空白液滴定的毫升數。