水質糞大腸菌群的測定濾膜法（三）

9.2培養

用滅菌鑲子夾取濾膜移放在MFC培養基（6.1）上，濾膜截留細菌面向上，濾膜應與培 養基完全貼緊，兩者間不得留有氣泡，然后將培養皿倒置，放入恒溫培養箱內,44.5°C ±0.5°C 培養 24h±2h。

9.3對照試驗
3. 1空白對照

每次試驗都要用無菌水（6.3）按照步驟9.1和9.2進行實驗室空白測定。

9. 3. 2陽性及陰性對照

將糞大腸菌群的陽性菌株（如大腸埃希氏菌Escherichia coli）和陰性菌株（如產氣腸桿 菌Enterobacter aerogenes）制成濃度為40~600 CFU/L的菌懸液，分別按照9.1~9.2步驟培養， 陽性菌株應呈現陽性反應，陰性菌株應呈現陰性反應，否則，該次樣品測定結果無效，應查 明原因后重新測定。

10結果計算與表示

10. 1結果判讀

MFC培養基上呈藍色或藍綠色的菌落為糞大腸菌群菌落，予以計數。

MFC培養基上呈灰色、淡黃色或無色的菌落為非糞大腸菌群菌落，不予計數。 結果判讀參考圖片見圖1。


無菌落生長
 
圖1結果判讀參考圖片

10.2結果計算

樣品中的糞大腸菌群數（CFU/L），按照公式（1）進行計算:

八 Ci*1000C =

式中：C——樣品中糞大腸菌群數，CFU/L；
Ci——濾膜上生長的糞大腸菌群菌落總數，個；
1000——將過濾體積的單位由ml轉換為L ；
/——樣品接種量，ml；

注：若平行樣結果都在20?60 CFU/L范圍內，最終結果取平均值以幾何平均計算。

10.3結果表示

測定結果保留至整數位，最多保留兩位有效數字，當測定結果N100CFU/L時，以科學 計數法表示。糞大腸菌群檢驗記錄及報告格式參見附錄A。

11精密度和準確度

11.1精密度

6個實驗室對低濃度（地下水，濃度均值為2.0X10² CFU/L）、中濃度（地表水，濃度 均值為

1.6X105CFU/L）和髙濃度（生活污水，濃度均值為1.6X10⁷ CFU/L）三個不同濃度 糞大腸菌群的實際

樣品和有證標準樣品（濃度為3670 MPN7L,可接受范圍為330? 7710MPN/L）進行了6次重復測定：
實驗室內相對標準偏差范圍分別為5.3%?12%、0.81%? 2.1%、0.51%?4.2%和7.7%?9.8%；實驗室間相對標準偏差分別為6.8%、3.9%、4.0%和3.6%； 實驗室間95%置信區間見表2 o

表2實驗室間95%置信區間

 
11.2準確度

6個實驗室對含糞大腸菌群濃度為3670MPN7L （可接受范圍為330-7710 MPN/L）的標 準樣品進行了6次重復測定：相對誤差范圍為-19%?-32%；相對誤差最終值為：-23%±10%。

注：微生物檢測數據為偏態分布，其測定結果全部經以10為底對數轉換后進行計算。

12質量保證和質量控制

12. 1培養基檢驗

更換不同批次培養基時要進行陽性和陰性菌株檢驗，將糞大腸菌群測定的陽性菌株（如 大腸埃希氏菌Escherichia coli）和陰性菌株（如產氣腸桿菌Enterobacter aerogenes）配成適 宜濃度，按樣品過濾（9.1）的要求使濾膜上生長的菌落數為20?60個，然后按培養（9.2）的要求進行操作，陽性菌株應生長為藍色或藍綠色菌落，陰性菌株應生長為灰色、淡黃色、 無色或無菌落生長。否則，該次樣品測定結果無效，應查明原因后重新測定。

12.2對照試驗

12.2. 1空白對照

每次試驗都要用無菌水做實驗室空白測定（9.3.1）,培養后的培養基上不得有任何菌落 生長。否則，該次樣品測定結果無效，應查明原因后重新測定。

12.2.2陽性及陰性對照

定期按照9.3.2進行陽性及陰性對照試驗，陽性菌株應呈現陽性反應，陰性菌株應呈現 陰性反應，否則，該次樣品測定結果無效，應查明原因后重新測定。

13廢物處理

使用后的廢物及器皿須經121°C髙壓蒸汽滅菌30 min或使用液體消毒劑（自制或市售） 滅菌后，器皿方可清洗，廢物作為一般廢物處置。

14注意事項

當樣品渾濁度較高時，應選用其他方法。

附錄A
（資料性附錄）
糞大腸菌群檢驗記錄及報告格式

表A. 1糞大腸菌群測定檢驗記錄

檢驗者：校對：審核:
 
注：可根據實際工作需要自行設計表格，至少要包括上述信息。
 

表A. 2糞大腸菌群測定數據報告格式

注：可根據實際工作需要自行設計表格，至少要包括上述信息。