污染細胞的支原體從哪里來

 在培養細胞時，人們常常關注細菌和真菌的污染，認為它們是細胞培養的主要干擾因素。但其實，更嚴重的是支原體 的感染，它的發生率非常高，而且不易被發現。本文威正翔禹/締一生物為您分析污染細胞的支原體從哪里來。

不僅普通光鏡下無法發現支原體，而且培養基也不容易變色。但支原體對細胞的各種干擾卻是不容忽視的。它不僅導致細胞狀態不佳，生長速度慢，而且會使細胞內DNA、RNA及蛋白表達發生改變，嚴重影響實驗結果。因此，在預防和治療支原體污染之前，有必要去了解細胞被支原體污染的可能途徑。

　　支原體可以通過頂部的細胞器特異性和宿主細胞結合。這些頂部的細胞器含有高濃度的粘附蛋白，可粘附到真核細胞并穿入到細胞內部。支原體缺乏細胞壁，它們的胞膜可和宿主的細胞膜融合并交換其胞膜和胞漿成分。

　　支原體污染的頻率和污染來源

　　細胞培養中有幾種支原體污染與人、牛和豬有關。實驗室的工作人員是口腔支原體、發酵支原體和人型支原體的主要來源。這三種支原體占細胞培養中支原體污染的一半以上，它們主要存在于人的口咽部。精氨酸支原體和無膽甾原體是另兩類細胞培養中的支原體，它們來自胎牛血清和新生牛血清。胰酶如果是豬來源的，那么也可能存在豬鼻支原體。圖1顯示了支原體的常見宿主以及污染細胞的發生率

　　支原體在實驗室內的擴散來源

　　McGarrity設計了一個模型，來發現支原體是如何在超凈臺里的細胞傳代過程中發生傳播的。他先故意用支原體感染細胞。在超凈臺中，用胰蛋白酶消化該污染的細胞后發現，活的支原體可從細胞培養瓶外的細胞計數板、移液器、廢棄盤中被技術員分離出來。即使過了四至六天，活的支原體仍然可以存在于超凈臺表面，可被成功恢復。在超凈臺里，傳代完被支原體污染的細胞后，再傳代干凈的不含支原體的細胞，結果仍然在6周后被檢測出支原體陽性。這些結果表明，支原體的傳播是多么的快速和容易！它也警告我們，要zui大限度的避免支原體的污染，因為一瓶細胞發生污染，就會帶來支原體傳播的可能。

　　未真正消毒的耗材、培養基和溶液

　　不恰當的消毒導致污染的另一個原因。高壓鍋或干熱烤箱中堆積太多的物品造成加熱不均，使一小部分耗材未得到消毒。滅菌循環時間過短是另一個消毒上犯的錯誤，特別是對于超過500ml的液體，或者是包含固體成分的溶液，或膠體物質如瓊脂、淀粉等。為了實現無菌，滅菌材料的尺寸、質量、性質和體積必須始終考慮。

　　在無菌和無昆蟲區域存放消毒好的物品，使防止再次污染的前提。良好的無菌操作也是至關重要的。

　　實驗室人員

　　在因人導致的細胞支原體污染中，口腔支原體發生率zui高，它主要存在人的口咽部。發酵支原體和唾液支原體也在污染的細胞培養液中被檢測出來，不過發生率更低。

　　被支原體污染的細胞

　　實驗室內細胞支原體的相互傳染，有必要對于從外源獲得的新的細胞系進行支原體檢測。一瓶細胞中的單個支原體的存在足以威脅到其他培養的細胞。支原體的污染能通過細胞操作產生的氣溶膠或液滴傳播。所以，應一次只操作一種細胞，為每種細胞系配置單獨的培養基和試劑，這能避免支原體的污染。

　　細胞培養的正確操作和對新培養的細胞定期檢查，可以減少支原體污染的機會。