本方法由酶免疫分析方法（EIA）測得的陽性樣品的增菌肉湯和 M 肉湯必須依照常規標準方法中所指示的，在選擇性培養基上做劃線接種，并必須將典型或可疑菌落按標準方法進行生化和血清學鑒定。
對于陽性結果的確定
①可借助比色計卡進行視覺檢查，當判斷陰性和陽性對照符合卡上所描述的標準時，陽性結果才有效。
②還可以通過儀器的方法，用帶有414nm 濾光片的光度計進行檢測，只有當陰性和陽性對照具有可接受的光密度值時，陽性結果才有效。
1、原理
沙門氏菌抗原的檢測是依據與沙門氏菌抗原具高特異性的高純化的抗體所進行的酶免疫分析來完成的。把沙門氏菌抗原的多克隆抗體吸附于96孔微量滴定板的小孔內表面上，把待檢樣品也放到板的小孔里。如果樣品中含有沙門氏菌抗原，它就與孔內附著的特異性抗體結合，樣品中的其他物質都會被沖洗掉。加入接合劑，如果沙門氏菌抗原與吸附在孔內表面的抗體相結合，那么可以進一步與接合劑結合，沖洗孔以洗去未結合上的接合劑，然后加入酶底物，如果樣品中有沙門氏菌抗原就會呈現出暗藍綠色。
2、試劑
①～?項可選用 TECRA Salmonella Visual Immunoassay 品名 Bioenterprises PtyLtd，28 Barcoo St Rosevillee，NSW2069，Australia）。若用其他替代品，必須先經試驗是等效的。
①抗體吸附板 Removawell?（Dynatech Laboratories，Inc.）Strips。吸附有沙門氏菌的多克隆抗體，96個孔。如不用應保存在2～8℃。
②托架足以固定每個孔或抗體吸附板。
③對照抗原 一小瓶陽性對照（凍干的），是經過純化的沙門氏菌抗原，它可以與沙門氏菌的抗體發生反應；一小瓶陰性對照（凍干乳糖），它不與沙門氏菌抗體發生反應。加H2O復原的抗原保存在2～8℃可以穩定28天。
④對照稀釋液 一小瓶（5mL/瓶）含有0.006g Tris（三羥甲基氨基甲烷）、0.044gNaCl、0.0025g 吐溫-20和0.005g 水楊乙汞的水溶液。
⑤接合劑 一小瓶（凍干的），含有與辣根過氧化物酶接合的147ng 抗沙門氏菌抗體（從羊來的），0.00686g Na2B4O7，0.12g 葡聚精 T10，0.06g 明膠水解物，0.0024g CaCI2和120ng 水楊乙汞。加 H2O 復原的接合劑保存在2～8℃，可以穩定28天。
⑥接合劑稀釋液 一小瓶（22mL/瓶），含0.42g Na2B4O7，0.193g NaCl，0.22g 明膠水解物和0.0022g 水楊乙汞水溶液。
⑦酶底物 一小瓶（凍干的）含0.0112g 2，2'-聯氮基-二（3-乙基苯并噻唑啉磺酸鹽）和0.123gNaH2PO4。加H2O復原的酶底物保存在2～8℃，可以穩定2個月。
⑧酶底物稀釋液 一小瓶（22mL/瓶）含0.116g 檸檬酸，0.0011g H2O2，0.0185g NaOH水溶液。
⑨終止液 一小瓶（6mL/瓶）含0.15g NaF 水溶液。（當心:不要碰到皮膚，如果一旦碰到皮膚，應用水沖洗該部位。）
⑩洗液濃縮液 一瓶（25mL/瓶），含1.45g Tris，7.03g NaCl，0.5g 吐溫-20和0.0025g水楊乙汞水溶液。
?內嵌式包裝物（用于固定放置試劑）。
?數據記錄紙。
?比色計卡 目測陰性和陽性試驗用。
?M肉湯：5.0g 酵母浸膏，12.5g 胰蛋白胨，2.0g D-甘露糖，5.0g 檸檬酸鈉，5.0g NaCl，5.0g K2HPO4，0.14g MnCl2，0.8g FeSO4，0.75g 吐溫-80把所有成分懸浮在1LH2O 中，加熱煮沸1～2min。以10mL 分裝到每支16mm×125mm 帶螺旋蓋的試管中，把蓋微旋上，在121℃高壓滅菌15min。然后把蓋旋緊，保存備用，最終pH值應為7.0±0.2。
⑤診斷試劑用于證實EIA試驗陽性結果培養物的常規方法所需的試劑。
3、儀器
①培養箱35～37℃。
②多用移液器 精確至50～250μL 和5～50μL 的可調移液器。
③水浴箱 能保持100℃，亦可用調至100℃ 的高壓滅菌器代替作為流動蒸汽的發生器。
④塑料擠水瓶500mL，為噴洗液用，也可以用自動清洗器。
⑤塑料包裝膜或可以封口的塑料容器在培養時覆蓋小孔。
⑥帶有 414nm±10nm 和 490nm±10nm 篩選濾光片的酶標儀或雙波長讀數器，可任選在414nm±10nm 可以通過微量板讀出數據。
4、通則
試驗盒中的各種成分，在不用時應保存在冰箱里。試驗盒只能用一次加完樣品、試劑或洗液的孔，不能重新使用。
對于所檢驗的每一組樣品，應有陽性和陰性雙重對照抗原，所有的對照都必須對試驗是有效的。
用數據記錄紙記下每個被檢測的樣品的位置。
對于每個樣品和試驗盒的每種試劑，都應用單獨的吸嘴，以免發生交叉污染。如果用塑料槽分裝接合劑和酶底物，一定要保證不交叉使用。
試驗盒中的試劑是作為完整的單位來使用的，不要把不同批號的試劑混合在一起使用。
5、樣品制備
①前增菌 把樣品置于非抑制性肉湯中，進行前增菌，促使沙門氏菌開始生長。對于不同的產品所用方法也可有所不同，可按照常規培養方法進行。
②選擇性增菌 按常規方法，把 1mL 培養過的前增菌液，轉種到亞硒酸鹽胱氨酸肉湯中，另1mL 轉種到四硫磺酸鹽肉湯中。除了生的或污染嚴重的樣品外，其他一切食品都在 35℃ 培養6～8h，而生的或嚴重污染的樣品的選擇性增菌必須在35℃培養16～20h 。
③后增菌 取出培養后的選擇性肉湯，用手或渦旋混合器混勻，從四硫磺酸鹽試管取1mL，轉種于預熱到35℃的含10mL 滅菌的 M 肉湯管中。同樣，也從亞硒酸鹽胱氨酸試管取1mL，轉種到另一支同樣的M肉湯管中。除了生的或嚴重污染的樣品外，對于其余的所有食品，均將 M 肉湯管置于35℃培養1～18h，并將其選擇性增菌肉湯管放回35℃培養箱再繼續培養16～18h。對于生的或嚴重污染的樣品，把 M 肉湯管置于35℃培養6h，并將其選擇性增菌肉湯管放回35℃培養箱再培養6h。
④EIA 分析樣品的制備 從培養箱取出M肉湯管，用手或渦旋混合器混勻，從同一樣品的每支M肉湯管各取1mL，放入一支干凈的帶螺帽試管中混合，在沸水浴或在流通蒸汽中加熱15min。把③中剩余的 M 肉湯，四硫磺酸鹽肉湯和亞硒酸鹽肉湯，放冰箱（2～8℃）保存，以備用于 EIA 陽性結果樣品的培養證實試驗，在 EIA 分析之前，應把熱的 M 肉湯冷卻至25～37℃。
6、酶標免疫分析
①以下試劑都必須在開始分析之前準備好。
a.合適濃度的沖洗液 用H2O或無離子水，把一小瓶濃縮洗液在塑料試劑瓶中稀釋成1L，塑料擠瓶用于手沖試驗板是最理想的。
b.陰性對照和陽性對照 把2mL 對照稀釋液加入盛有凍干的陰性對照抗原的小瓶里充分混勻。同樣地加 H2O 復原陽性對照，即把2mL對照稀釋液加入盛有凍干的陽性對照抗原的小瓶里，充分混勻。
c.接合劑 把5mL 稀釋液，加入裝有凍干的接合劑的小瓶中，使其在室溫下水化，然后把瓶子中的液體轉入到接合劑稀釋液的小瓶里慢慢混勻。
d.酶底物 把一小瓶酶底物稀釋液倒入凍干的酶底物中，一定要保證其完全溶解，并在用前達到室溫，加H2O復原的酶底物將呈淡綠色。
e.終止液 可以直接用，不需加H2O復原。
②保證試驗盤中有所需數量的測試小孔。一個孔用于食品樣品，另四個用做對照，一定要把孔的位置固定，把要用的孔從上面揭去封口薄膜，將加熱好的 M 肉湯樣品0.2mL 放入一個孔中，在兩個孔內各加0.2mL 陰性對照液，在另兩孔中各加入0.2mL 陽性對照液，在樣品記錄紙上記下樣品的位置。（注意:一定要在每個測試條的一端寫上數字標記。）
③把試驗板蒙蓋起來，放入實驗室標準培養箱，在35～37℃培養30min。試驗板一定要蒙蓋起來，以防蒸發，可用塑料薄膜或密封的塑料容器。
④培養后，用已裝有沖洗溶液的擠水瓶，或用自動清洗機沖洗試驗板，其步驟如下。
a.迅速翻轉試驗板，把孔中的內容物完全倒入一容器中。
b.穩固地把試驗板面向下在紙巾上輕扣幾次，以除去殘余的液體。
c.把沖洗液倒滿小孔。
d.重復a～c的步驟兩次或更多次。
⑤按④a和④b的方法把試驗板排空，然后向每一個孔中加0.2mL 加 H2O 復原的接合劑，把試驗板蒙蓋起來，在35～37℃培養30min。
⑥把試驗板的內容物排空，并按④a～④c的方法將其充分沖洗四遍，然后按④a和④b的方法將試驗板處理干凈。
⑦向每個孔中加入0.2mL 加 H2O 復原的酶底物，在室溫下（20～25℃）培養，直到陽性對照的顏色變到與比色卡上指示的陽性對照的顏色一致或讀數 A≥1.0時（吸收值）才停止培養。由于顏色發生聚集于孔的周邊，所以在檢視結果之前，先輕輕敲打試驗板的側邊，使孔內液體混合均勻，這是很重要的只有這樣才能得到精確的結果。
⑧在每個孔中加入0.02mL 終止液，培養時間大約10～20min。如果超過25min，而吸收值（A）還不能達到1.0，這個實驗就無效。
7、讀數
實驗室的結果可①目測，或用②微量板讀數器。
①把試驗盤放到一個白背景上，然后把每個實驗孔與比色器的色卡比較。陽性對照應出現很強的藍綠色，表明所有的試劑功能是正常的。如果陽性對照的顏色比比色器中陽性對照色卡的顏色淺，那么實驗無效。如果陰性對照的顏色比比色器中陰性對照色卡的顏色深，說明試驗盤可能沖洗得不好，分析必須重新進行，兩個抗原對照通過目測應呈現一致。
②藍綠色終點產物的最大吸收值 A 出現在414nm，所以可以在414nm±10nm 讀結果對具有單波長讀數器，設置讀數器的“零點”（空白）用加有200μL 的底物或H2O的小孔。雙波長的讀數器的“零點”（空白）用空氣并可將其第二個參考波長定在490nm±10nm。A ≥0.3表明陽性結果。陰性對照的 A＜0.2，陽性對照應該是 A≥1.0。
8、EIA陽性樣品的證實
EIA 的陽性檢視結果，表明可能有沙門氏菌，然而，由于抗體可能與一些其他細菌發生交叉反應，故應按照常規標準培養方法，從四硫磺酸鹽肉湯亞硒酸鹽胱氨酸肉湯，M 肉湯中取樣在 HE，XLD，BS 培養基的平板上劃線分離培養，并將典型或可疑菌落進行生化和血清學鑒定。