河豚毒素檢測試劑盒技術詳解

武漢優博生物技術有限公司開發的河豚毒素ELISA檢測試劑盒，檢測限量達到2 ppb,在美國、日本、俄羅斯、北歐等食品企業、政府檢驗機構廣為應用，質量合格率達到100%，誤差1%左右，大量的實驗數據標明，河豚毒素檢測試劑盒技術水平國際一流水平。

與LC-MS儀器對比試驗，結果符合率100%，批間差異小于0.1%，試劑盒穩定高，抗干擾力強。

ELISA標準工作曲線

按照競爭性ELISA操作過程，對不同稀釋度的河豚毒素標準液進行測定，以各孔平均OD值與對照組的OD值比值的logit函數為縱坐標，以不同濃度河豚毒素標準品濃度的對數為橫坐標，繪制出標準曲線。結果如圖所示：線性回歸方程為y＝-1.9695x＋3.3899，R2＝0.9902；線性范圍為5-500 ng/mL，最低檢測限為5 ng/mL。

圖1  ELISA標準工作曲線（縱坐標不是抵制率logit(B/B0)）   

2. 回收率實驗

添加250 ng和500 ng的河豚毒素標準品的1 g河豚魚魚肉中，通過競爭性ELISA檢測結果如表所示：添加250 ng標準品時，回收率為159%，添加500 ng標準品時，回收率為108%。產品回收率偏高，我們分析可能是由于洗板次數太多，導致少量的抗體抗原脫離，或者是由于實驗時間偏長，抗體的效價減弱引起。產品回收率偏高，不影響檢測靈敏度，由于產品檢測限較低(5 ng/mL),所以該產品可以滿足日常對河豚魚的檢測工作要求。

表2模擬樣品回收率實驗

3. 穩定性實驗

對濃度為10、50、100、150 ng/mL的標準品進行檢測，結果如表所示：10-150 ng/mL 4個標準品濃度變異系數為1.93-3.77%，平均變異系數為2.76%。   

變異系數CV %=（標準偏差SD /平均值Mean）×100%

4. 樣品中河豚毒素的檢測

方法依據：GBT 5009.206-2007 鮮河豚魚中河豚毒素的測定 

計算公式：X＝C×D×V/m

         X:樣品中河豚毒素含量，單位為微克每千克(μg/kg)

         C:酶標板上測的河豚毒素含量，單位為納克每毫升（ng/mL）

         D:樣品稀釋倍數

         V:提取溶液的定容體積，單位為毫升（mL）

         m:檢測樣品的質量，單位為克（g）  

關于河豚魚的毒性,一般分為4個毒力等級:毒性高于1000 MU/g為劇毒級;介于100 MU/g～1000 MU/g之間為強毒級;介于10 MU/g～100 MU/g之間為弱毒級;低于10 MU/g為無毒級(無毒級中使小鼠致死的情況可視為微毒級)。據張理對鼠單位的定義 (1 MU=0.22 μg)。

根據上述方法繪制標準曲線，并得出回歸方程(y=a×x-b)。其中 a、b為系數，y為抑制率(A0-A /A0%)，x為Log(100*河豚毒素濃度)。根據樣品的OD₄₉₀ (A)值計算抑制率,再根據公式計算出河豚毒素的濃度。結果上表所示：河豚毒素在浙江與海南省常見河豚魚的種類分布差異顯著，菊黃東方鲀未檢測出毒性，屬于無毒級別；雙斑東方鲀雖有檢測出毒性但也屬于無毒級別，其中雄性雙斑東方鲀的脾臟和胃毒力高于雌性；野生月腹刺鲀的毒力明顯高于養殖品種。