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  • 發布時間:2022-05-31 12:03 原文鏈接: 洗脫的方法介紹

    洗脫也可以分為兩種:

    一種是選擇與配體有親和力的物質進行洗脫,另一種是選擇與待分離物質有親和力的物質進行洗脫。

    前者在洗脫時,選擇一種和配體親和力較強的物質加入洗脫液,這種物質與待分離物質競爭對配體的結合,在適當的條件下,如這種物質與配體的親和力強或濃度較大,配體就會基本被這種物質占據,原來與配體結合的待分離物質被取代而脫離配體,從而被洗脫下來。

    例如用凝集素作為配體分離糖蛋白時,可以用適當的單糖洗脫,單糖與糖蛋白競爭對凝集素的結合,可以將糖蛋白從凝集素上置換下來。

    后一種方法洗脫時,選擇一種與待分離物質有較強親和力的物質加入洗脫液,這種物質與配體競爭對待分離物質的結合,在適當的條件下,如這種物質與待分離物質的親和力強或濃度較大,待分離物質就會基本被這種物質結合而脫離配體,從而被洗脫下來。

    例如用染料作為配體分離脫氫酶時,可以選擇NAD+進行洗脫,NAD+是脫氫酶的輔酶,它與脫氫酶的親和力要強于染料,所以脫氫酶就會與NAD+結合而從配體上脫離。

    特異性洗脫方法的優點是特異性強,可以進一步消除非特異性吸附的影響,從而得到較高的分辨率。另外對于待分離物質與配體親和力很強的情況,使用非特異性洗脫方法需要較強烈的洗脫條件,很可能使蛋白質等生物大分子變性,有時甚至只能使待分離的生物大分子變性才能夠洗脫下來,使用特異性洗脫則可以避免這種情況。

    由于親和吸附達到平衡比較慢,所以特異性洗脫往往需要較常的時間和較大的洗脫條件,可以通過適當的改變其它條件,如選擇親和力強的物質洗脫、加大洗脫液濃度等等,來縮小洗脫時間和洗脫體積。

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