用活化劑裂解方法從懸浮培養的HeLa細胞中制備細胞核
| 實驗材料 | HeLa 細胞 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | TM-2 緩沖液 |
| 儀器、耗材 | 塑料離心瓶 Corex 管 |
| 實驗步驟 | 1. 轉瓶培養 4 升 HeLa 細胞，便細胞濃度達到 1.0x106 細胞/ml。 2. 細胞在 1 L 的塑料離心瓶中，用 Sorvall 的 RC-3B 離心機，H-600A 轉頭，3000 r/min 離心 5 分鐘。 3. 在 30 ml 的 Corex 管中，用 10 ml 冰預冷的 PBS 清洗各細胞沉淀。 4. 細胞沉淀用 10 ml TM-2 緩沖液重懸浮，室溫孵育 1 分鐘。 TM-2 緩沖液： 0.01 mol/L Tris-HCl ( pH 7.4) 0.002 mol/L MgCl2 0.0005 mol/L PMSF（臨用前添加） 5. 將裝有 TM-2 懸浮液的試管放到一個含冰水的燒杯中冰浴 5 分鐘。 6. 加入 Tritron X-100 至終濃度為 0.5%，再冰浴 5 分鐘。 7. 3 次通過 22 號針頭剪切細胞。 8. 取 5 μl 加到一 22 mm2 的玻璃蓋玻片上，在相差顯微鏡下檢查細胞核。 9. 用 Sorvall 的 RC-5B 離心機，SS-34 轉頭在 4℃，800 r/min 離心 10 分鐘，將細胞核從胞質中分離出來。 10. 用 10 ml TM-2 緩沖液清洗兩遍細胞核。 |
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