活化劑裂解方法制備細胞核實驗

實驗材料 HeLa 細胞

試劑、試劑盒 TM-2 緩沖液

儀器、耗材 塑料離心瓶Corex 管

實驗步驟

1. 轉瓶培養 4 升 HeLa 細胞，便細胞濃度達到 1.0x106 細胞/ml。

2. 細胞在 1 L 的塑料離心瓶中，用 Sorvall 的 RC-3B 離心機，H-600A 轉頭，3000 r/min 離心 5 分鐘。

3. 在 30 ml 的 Corex 管中，用 10 ml 冰預冷的 PBS 清洗各細胞沉淀。

4. 細胞沉淀用 10 ml TM-2 緩沖液重懸浮，室溫孵育 1 分鐘。

TM-2 緩沖液：

0.01 mol/L Tris-HCl ( pH 7.4)

0.002 mol/L MgCl2

0.0005 mol/L PMSF（臨用前添加）

5. 將裝有 TM-2 懸浮液的試管放到一個含冰水的燒杯中冰浴 5 分鐘。

6. 加入 Tritron X-100 至終濃度為 0.5%，再冰浴 5 分鐘。

7. 3 次通過 22 號針頭剪切細胞。

8. 取 5 μl 加到一 22 mm2 的玻璃蓋玻片上，在相差顯微鏡下檢查細胞核。

9. 用 Sorvall 的 RC-5B 離心機，SS-34 轉頭在 4℃，800 r/min 離心 10 分鐘，將細胞核從胞質中分離出來。

10. 用 10 ml TM-2 緩沖液清洗兩遍細胞核。