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  • 發布時間:2019-06-28 11:27 原文鏈接: 活細胞間接免疫熒光法

    一.實驗器材:

    1  器材:

    40孔塑料板、40孔板離心機、微量加樣器、振蕩器、蓋玻片、熒光顯微鏡等

    2  試劑:

    單抗隆抗體(單抗)、熒光標記抗鼠免疫球蛋白、PBSpH7.2-7.4)、甘油、疊氮鈉(NaN3)等

    二.方法(微量法)

    1  將分離好的單個核細胞用PBS2次,1000rpm每次10分鐘。用含0.1% NaN3 PBS調細胞濃度在0.5-1×108/ml5000-1/ml),加在40孔板上,每孔10ul,含5-10×105細胞,然后加入單抗(第一抗體)50ul(同時加入AB型血清5ul)振蕩混勻,置4,至少30分鐘。

    2  用含0.1%NaN3PBS洗一次,1000rpm離心3-5分鐘棄上清。

    3  加熒光標記抗鼠抗體(第二抗體)工作液20ul,混勻振蕩置4/30分鐘(時間不能超過)。

    4  用含0.1%NaN3PBS2次,方法同上,棄上清,加入含60%甘油的PBS5-10ul(依據所加細胞量而定)振蕩均勻,點片,并加蓋玻片。

    如想次日看結果可在第三步后每孔加入1%多聚甲醛PBS每孔

    50ul,混勻置4過夜,次日離心棄上清按四步做法觀察結果(為膜熒光)。


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