流式細胞儀在醫學研究與檢驗工作中的應用

流式細胞儀（flow cytometry, FCM）是一種對單細胞或其他生物粒子膜表面以及內部的化學成分進行快速定量分析與分選的醫學儀器。它集光學、電子學、流體動力學、細胞化學、生物學、免疫學和計算技術于一體，可以高速度分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數，具有速度快、精密度高、準確性好等特點。目前，流式細胞儀已普遍應用于免疫學、血液學、腫瘤學、細胞生物學、細胞遺傳學、生物化學等臨床醫學和基礎醫學研究領域。

　　1工作原理

　　流式細胞儀主要由液流系統、光學系統、檢測系統和數據處理系統4部分組成，有些FCM還包括細胞分選系統。

　　當制備成單細胞懸液的待測細胞經特異性熒光染色后放入樣品管中，通過充滿鞘液的細胞流動室，在穩定的壓力下細胞懸液保持在鞘液中心恒速流動，排成單列由噴嘴噴出，形成細胞液柱進入檢測區域，細胞被激光激發后發出散射光與熒光，檢測器根據光的強度，將光轉變成與光量成比例的電脈沖，并使電脈沖經過放大處理后，將收集結果進行分析、比較和顯示。此外，它還能在檢測時根據液滴偏轉原理進行分選。

　　2應用

　　21流式細胞儀在免疫學中的應用

　　目前，FCM用于免疫學基礎研究和臨床醫學的各個方面［1］。它在臨床醫學中的應用，主要是流式免疫檢測技術，它克服了傳統免疫技術難以準確定量的不足，并且，可對單個細胞進行單色或同時多色熒光染色標記。

　　211淋巴細胞亞群分析自身免疫疾病、免疫缺陷性疾病、變態反應性疾病、病毒感染、惡性腫瘤等均有淋巴細胞亞群的異常改變。所以檢測外周血T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)及其比值（CD4+/CD8+）是反映機體免疫狀態的重要參數之一。應用不同的CD系列的單克隆抗體，FCM能區分出不同的淋巴細胞亞群，并計算出他們的數量及相互間的比例，對控制這些疾病的發生發展、了解疾病的發病機制、指導臨床治療,都有極其重要的意義［2］。比如，由于HIV感染后CD4+細胞大量被破壞，致使CD4+/CD8+比例<1，因此檢測CD4+T細胞的絕對值及其淋巴細胞中的比例對AIDS的確診起重要作用。在嚴重急性呼吸綜合征（SARS）患者中，FCM檢測出84%的SARS患者淋巴細胞絕對計數降低，82%患者淋巴細胞百分率降低。從淋巴細胞亞群的分析結果看，SARS患者各類淋巴細胞亞群(T/B細胞、NK細胞)均受到不同程度的破壞。T細胞受損者最多(占95%)，T4細胞較T8細胞受損嚴重［3］。FCM的T細胞亞群測定還可用于監測移植后血液中或移植器官內免疫成分的變化，從而預測移植免疫排斥反應。如根據淋巴細胞的活化標志HLA-DR,配合分型標記物雙標，可方便地測出活化的細胞毒T細胞和NK細胞，它們的升高意味著排斥反應發生的可能性增加。

　　212細胞特異性標記物的分析FCM能檢測各種免疫細胞的特異性標志物及細胞內的各種細胞因子、表面受體（淋巴因子受體、干擾素受體、白細胞介素受體等）的定量分析，在冠心病、動脈粥樣硬化、惡性腫瘤、自身免疫性疾病的臨床應用相當廣泛。細胞內的受體，如雌激素、糖皮質激素受體的檢測，可指導乳腺癌的性激素治療和糖皮質激素的治療［3］。FCM與經典化學同位素標記測定受體法相比，優勢在于它的單細胞測定可在混合細胞中選擇性測定其中一群，可在同一群細胞中觀察每個細胞上受體量的差異，并可將死細胞扣除［4］。