流式細胞儀在檢測循環腫瘤細胞CTCs上的應用

實驗設計

CTCs在患者血液中的含量非常稀少，大約每10⁶~10⁷個白細胞中僅1個至幾個CTCs存在，靈敏度一直是其檢測及應用的主要障礙。在眾多文獻報道中，人們常利用腫瘤細胞摻入試驗評價CTCs檢測方法/系統的靈敏度、特異性、準確性、重復性等指標。

本研究選用高表達EpCAM的結腸癌細胞株（SW620）作為摻入細胞（圖1），第一部分將不同數量（0～256個）SW620細胞摻入到1×10⁶個正常人PBMCs中，用ACEA Quanteon流式細胞儀檢測SW620細胞的實際個數，確定儀器檢測CTCs的靈敏度。

一、SW620細胞表面EpCAM表達鑒定

圖1. SW620細胞表面EpCAM表達鑒定。將新鮮血（2mL）或摻有SW620細胞的新鮮血（1000個/2mL）用Ficoll-Paque PLUS淋巴細胞分離液（GE healthcare,17-1440-02）分離PBMCs后，在以上樣本以及單獨SW620細胞中分別加入抗CD45-FITC和抗EpCAM-APC抗體孵育，設同型抗體對照，在ACEA Quanteon流式細胞儀上測試，數據采用相同設門策略分析。a. SW620細胞用IgG1 FITC和IgG2b APC同型抗體染色的結果； b-d. SW620細胞、新鮮血和摻有SW620的新鮮血用CD45-FITC和EpCAM-APC抗體染色的結果。

二、ACEA Quanteon可檢測到10⁶個正常人白細胞中的1個腫瘤細胞

圖2. 靈敏度分析。收集對數生長期的SW620細胞，標記 EpCAM-APC熒光抗體，設同型抗體對照，冰上孵育60min，用含0.5%BSA的D-PBS洗兩遍；將染色后的SW620細胞按0，2，4，8，16，32，64，128，256，512個（體積20μL）分別摻入2×10⁶個PBMCs（體積180μL）中，渦旋混勻（理論上，每100μL中含SW620細胞數：0，1，2，4，8，16，32，64，128，256），在ACEA Quanteon流式細胞儀上中速采集100μL，記錄EpCAM+細胞數量。A. 設門策略。FSC-SSC散點圖上設P1門去除碎片和雜信號，基于P1門，在散點圖上表現為EpCAM+的細胞即為摻入的SW620細胞；B. ACEA Quanteon流式細胞儀上的測試結果；

結論
ACEA Quanteon流式細胞儀檢測結果顯示，在不同細胞數量摻入水平，實際檢出細胞數量與理論數量之間呈現良好的線性關系，靈敏度為0.0001%，即可檢測到10⁶個正常人白細胞中的1個腫瘤細胞，證明ACEA Quanteon流式細胞儀在檢測CTCs方面具有高靈敏度。

參考文獻

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