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  • 發布時間:2023-08-02 14:42 原文鏈接: 流式細胞技術與流式細胞儀

    流式細胞技術 (Flow Cytometer, FCM)是細胞學的研究手段之一。其能在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數。例如,采用雙激光的方法,研究者可進行核型分析和鑒定,分離純化某號染色體并構建染色體特異性DNA文庫。流式細胞技術是當代最先進的細胞定量分析技術之一。

    該技術依托 流式細胞儀 。其主要部件為光源、流動室、熒光檢測部件、分選器。

    (1)光源。通常是激光光源,目的是提供足夠的熒光激光能量。

    (2)流動室。其為流式細胞儀中最重要的部分。目的是使細胞流穩定流動,依次通過固定的檢測區。其間一道加入還有鞘液(sheath fluid),使樣品微粒之間相互分離,基于 鞘流原理 ,使微粒恒定處于同軸流動的中心位置。流動室的設計運用 液體聚焦原理 ,把激光激發點放在液流聚焦點上,該處是液流直徑最小處,通常為10-20μm,做到了單個細胞進入檢測區。

    (3)熒光檢測部件。染色細胞通過激光束時會發出熒光,檢測系統將接收的這些熒光轉換成與其量大小成正比的電壓脈沖信號,該脈沖稱為 峰值脈沖 ,分析系統根據這些來自不同方向的信號把不同的細胞群加以區分。散射光是圍繞細胞360°散發的,所以檢測裝置里一般有90°散色光檢測器(SSC,側向散射光)和前向散射光檢測器(FSC,前向角度散射光)。由于側向散射光強度較弱,因此光電轉換器件選用增益較大的 光電倍增管 。一般來說,6°以內的前向散射光為小角度散射光,可反映細胞體積的大小。大于6°的前向散射為大角度散射光,可提供細胞內的信息,特別是分葉核的信息,細胞質粒存在與否會明顯改變前向大角度散射光的強度。由于前向散射光的強度較強,因此用光電二極管作 光電轉換器 。

    (4)分選器。細胞的分選是通過分離含有單細胞的滴液實現的。通過特異性識別與給液滴加電(2kV~6kV),施加靜電場,來實現分離。

    過程細節:被激光照射的染色細胞會產生散射光和激發熒光。這兩種光信號同時被光電二極管和光電倍增管接收后轉換成電脈沖信號。無論是散射光或熒光信號,檢測的目的都是要分析不同的粒子。分析的方法有兩種,一是測量粒子通過激光束的最大電壓(與熒光強度成正比),二是測量脈沖的面積。再經過A/D 轉換器將脈沖信號變換成二進制數字信號由計算機處理。光信號基本上反映了細胞體積的大小,熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度。這種屬分析型流式細胞儀。分選型則是則是將液滴充電后送入上面描述的分選器中進行分離,目的是為了將所需的細胞做進一步的培養、觀察和實驗。

    染色體倍性不同的細胞,染料吸附于染色體的量迥異,激發的熒光強度限定于一定區間。因此可以對染色體倍性實施鑒定。

    總而言之,流式細胞儀能夠對細胞的性質進行系列分析,是細胞學研究的重要工具。


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