細胞凋亡研究
細胞凋亡是細胞在基因控制下的有序死亡，在疾病發生、發展中有重要作用，因而研究細胞凋亡有重要意義。細胞凋亡檢測方法很多，應用流式細胞儀技術可根據細胞在凋亡過程中發生一系列形態、生化變化從多個角度對細胞凋亡進行定性和定量的測定。
細胞形態變化：通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化來觀察細胞凋亡。在細胞凋亡早期，細胞前向角光散射的能力顯著降低，90°角光散射的能力增加；在細胞凋亡晚期，前向角和90°角光散射的信號均降低。此方法特異性不強，目前使用較少。
2 細胞膜功能改變：
（1） 磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine PS）異位：正常情況下，PS位于細胞膜內層，細胞發生凋亡時PS從細胞膜內翻轉并暴露在細胞膜外層，是細胞發生凋亡的早期事件。PS與Annexin Ⅴ（一種具有強力抗凝作用的血管蛋白）具有高度親和力。應用流式細胞儀采用FITC- Annexin Ⅴ/PI雙染法進行細胞凋亡檢測，可同時描述三群不同狀態細胞：FITC- Annexin Ⅴ-/PI-細胞，即正常活力細胞；FITC- Annexin Ⅴ+/PI-細胞，即凋亡細胞；FITC- Annexin Ⅴ+/PI+細胞，即已死亡細胞。此種方法操作過程簡單，指標敏感，應用者越來越多。
（2） PI/Hoechst33342雙染法：Hoechst33342（HO）是一種DNA的特異性熒光染料，可通過完整細胞膜，應用PI/Hoechst33342可將細胞分為三群：正常活細胞（HO強/ PI-），凋亡細胞（HO弱/ PI-），（由于凋亡細胞發生DNA降解和丟失，導致HO熒光減弱），死亡細胞（HO弱/ PI+）。此種方法再結合凋亡細胞前向角光散射能力降低的特點，能更好地鑒定凋亡細胞，但HO須紫外光激發，由于很多流式細胞儀不配有紫外激光，故此法應用受限。
（3） 吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)雙染法: AO是一種異染性熒光染料,可通過完整的質膜,它與核酸的結合主要是嵌入DNA雙鏈的堿基之間，其發射峰為530nm，呈綠色熒光。EB的理化特性與PI相似，不能通過完整質膜。應用AO/EB雙染法也可以將細胞分成三群：正常活細胞（AO強/ EB -），凋亡細胞（AO弱/ EB -），死亡細胞（AO弱/ EB +），原理與PI/Hoechst33342雙染法相似，不同的是AO/EB雙染法所的激發光是被廣泛使用的氬激光（488nm），而不須紫外光，其缺點是染色過程較復雜，且AO易污染設備管道，因此使用此法者較少。
（4） 放線菌素D(7-AAD)染色法：7-AAD是一種核酸染料，它不能通過正常質膜，隨著細胞凋亡、細胞死亡過程，質膜對7-AAD的通透性逐漸增加，結合細胞凋亡中DNA的有控降解，最后通過7-AAD標記DNA的強弱，將細胞分為三群：7-AAD強為死亡細胞，7-AAD弱是凋亡細胞，7-AAD-為正常活力細胞。此法具有染色快速、簡便、價格便宜等優點。另外，由于此法不破壞細胞膜，故還可聯合使用FITC、PE標記的膜蛋白,對特殊細胞群及亞群進行多色熒光分析(雖然AO/EB雙染法也不破壞被檢細胞膜,但由于AO及EB的發射光波譜分別與FITC和PE的發射光波譜相似，故AO/EB法不能與FITC和或PE聯合使用)。此法是應用核酸染料測定細胞凋亡的流式細胞儀法中十分實用的方法。
3. 細胞器改變： 線粒體膜APO2.7蛋白表達：早期凋亡細胞的線粒體膜出現APO2.7蛋白表達，利用熒光標記的單克隆抗體，運用流式細胞術可以檢測早期凋亡細胞。
4 .DNA含量變化：
主要是PI染色法，由于凋亡細胞DNA發生有序降解，被降解的低分子量DNA片段從變性細胞膜（經乙醇及透膜劑處理）漏出細胞外，使得凋亡細胞內的DNA含量減低，在流式細胞儀測定細胞DNA含量直方圖中G1峰前可出現亞二倍體峰，即所謂凋亡峰。通過測定凋亡峰百分含量，便可知凋亡細胞比例。此法簡便、快速，是目前常用的、經典的測量凋亡細胞的方法。此法存在問題：少量的正常的低DNA含量細胞、由于機械損傷產生DNA含量減低的壞死細胞、染色體丟失的分裂相細胞以及細胞碎片和微核等都可能出現在亞二倍體峰內。因此，此法的特異性較低。
5. DNA斷裂點標記：細胞凋亡時發生DNA斷裂,利用末端轉移酶(TdT)可以將dUTP標記到斷裂點上,稱作原位缺口末端標記（TUNEL）技術。此法有直接標記和間接標記兩種，前者的標記物是FITC-dUTP，后者的標記物是生物素(biotin)標記的dUTP,需要再用FITC標記的親和素(avidin)與生物素標記的dUTP結合，使標記反應倍增，故間接標記法靈敏度高，但操作較復雜。TUNEL還可以配合其它單抗同時進行細胞表型分析，或與DNA含量同時分析。TUNEL法因其靈敏度高而被廣泛采用。
6 細胞凋亡相關基因產物檢測：細胞凋亡是一個多種基因參與的復雜過程,目前已知與bcl-2基因、c-myc基因、P53基因等有關，這些基因都有相關產物，目前針對這些相關產物已有單克隆抗體生產，應用這些單抗，通過流式細胞儀可檢測造血細胞凋亡相關基因蛋白表達水平，相互關系。
流式細胞儀測定細胞凋亡方法、層次眾多，且具有快速、準確特點，應用十分廣泛。在實際應用中應注意采用多種方法結合使用，使結果更加可靠準確。