實驗簡介
噬藻體是水體中常見的浮游病毒，具有控制有害藻華、調節水生態結構、以納米尺度驅動全球生物地球化學循環、特別是碳循環的一類不可忽視的戰略生物資源；異彎藻是水體中的常見藻類，在適宜的溫度下會大量生長，曾在大連灣、膠州灣等曾多次形成赤潮，對異彎藻計數是水質檢測中常見的檢測項目。
異彎藻富含葉綠素，葉綠素在藍光激發下有紅色自發熒光；檢測水體中大腸桿菌的含量，常作為水體污染指數的衡量標準。
本實驗用核酸染料 SYBR green I 染色，借助 CytoFLEX 流式細胞儀對噬藻體、大腸桿菌、異彎藻進行區分，并絕對計數。與傳統的顯微鏡計數及平板菌落計數法等相比，具有速度快，操作簡便，結果準確的優點。
材料與方法
? 試劑
? 樣品制備
| Sample Type | 噬藻體；大腸桿菌；異彎藻 |
| Species | 病毒；細菌；藻類 |
| Age of specimen | 新鮮樣本 |
| Prep Method | 1. 準備以下四管樣本：噬藻體、大腸桿菌、異彎藻、三者混合（用 TE-buffer 稀釋）； 2. SYBR green I（Invitrogen，母液液為 10000×，DMSO 稀釋，-20 ℃ 冰箱保存）。使用 時需要將母液稀釋 200 倍使用（超純水稀釋），SYBR Green I 80°避光染色 10 min； 3. 上機檢測。 |
? 儀器配置
| Instrument Configuration | VSSC (Yes/No) | Plate or Tube Format |
| B5-R3-V5 | Yes | Tube |
數據分析
1. 建立 FSC/VSSC-Log 雙參數散點圖，SYBR /VSSC-Log 散點圖用于區分病毒與細菌，PC5.5/VSSC-Log 散 點圖用于區分藻類；
2. 將閾值設定在 SYBR 通道，以 SYBR green I 染色的 TE-buffer 作為對照，界定閾值將雜信號去掉；
3. 分別檢測以下樣本：A：SYBR green I 染色噬藻體、B：SYBR green I 染色大腸桿菌、C：SYBR green I 染色 的噬藻體、大腸桿菌、異彎藻三者混合樣本。
實驗結果
A：SYBR green I 染色噬藻體
B：SYBR green I 染色大腸桿菌
C：SYBR green I 染色的三者混合樣本
CytoFLEX 是第一臺借助 VSSC 可檢測 100 nm 微顆粒的流式細胞儀，在本次實驗中 CytoFLEX 流式細胞儀可通 過熒光信號和 VSSC 對噬藻體病毒進行區分，并以其強大的靈敏性區分 DNA 含量不同的噬藻體與大腸桿菌。 除此之外，CytoFLEX 有自動計數功能，與用戶傳統方式的計數方式做比較，結果一致。