◆需氧菌。初次分離培養時，最好在5%～10%C02環境中，以促進其生長。
◆普通培養基中須加入X和V因子，才能生長。
◆巧克力瓊脂平板上生長較佳：圓形、光滑、濕潤、邊緣整齊，呈露滴狀的小菌落。48h后可形成直徑1.0～1.5mm灰白色較大的菌落。有莢膜菌株的菌落呈輕度粘稠。
◆衛星現象：有助于對流感嗜血桿菌的鑒定。
當流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上共同培養時，由于后者能合成較多的V因子，可促進流感嗜血桿菌的生長，在葡萄球菌菌落周圍生長的流感嗜血桿菌菌落較大，離葡萄球菌菌落越遠的菌落越小。
◆液體培養基中：有莢膜的菌株呈均勻混濁生長，無莢膜的R型菌株則為顆粒狀沉淀生長。