淺談全自動生化分析儀項目間試劑交叉污染及其解決方法

　　在生化試劑的應用過程中我們往往會碰到交叉污染的問題，從而導致結果的偏離，影響臨床結果的報告和臨床病情的診斷。所以正確認識交叉污染問題及有效排除顯得尤為重要。 
　　交叉污染簡單分析是生化儀使用過程中永恒的話題，從儀器角度分析交叉污染的來源主要包括樣本針攜帶污染 ，試劑針攜帶污染 ，攪拌棒攜帶污染， 清洗系統攜帶污染 ，比色杯污染。主要原因 1. 樣品針，試劑針彎曲，特富龍涂層剝落，針堵塞，沖洗水沖洗不充分 。2，攪拌棒特富龍涂層剝落，攪拌棒表面有頑固性污漬，沖洗水沖洗不完全。3.比色杯劃痕較多，沖洗水沖洗不完全。4.干燥棒攜帶污染。 
　　那如何鑒別交叉污染的類型從而及時排除？ 
　　1. 樣品針攜帶污染：同一血清分為五份，分別測定蛋白項目，重復性差。 
　　2. 試劑針攜帶污染：① 部分試劑極易變質，可通過肉眼觀察發現 ② 以蒸餾水為樣本， 重復測定以下項目組合 10 次以上：AST 、 ALT （前）+ LDH （后）； TCHO（前）+TBA（后），后者測定結果偏高但重復性較好。 
　　3. 攪拌棒攜帶污染：對同一份血清標本重復測定GGT 或 ALT或AST 20次以上，結果重復性較差且有走高趨勢。 
　　4. 清洗系統攜帶污染：①在樣本測定過程中，加做室內質控，部分項目測定異常或者失控 ②在樣本測定過程中以蒸餾水為樣本，多次測 定LDH、P、Mg、TBA，結果重復性不好。 
　　5. 比色杯污染：在每日早晨剛開機時對所有項目做試劑空白測定，試劑空白吸光度或者試劑空白吸光度變化率結果變高，TBA（循環酶速率法）經常出現負值，蛋白項目、血脂項目結果偏高，膽紅素（釩酸鹽法）易出現異常值。 
　　解決辦法： 
　　①定期進行儀器的維護保養。②按要求及時更換零部件。③定期對儀器進行校準。④全自動生化分析標本和試劑用量少，殘存少量即會影響測試結果，每天應用無水乙醇擦洗并定期更換干燥棒，保證比色杯清洗后不留殘液，避免比色杯的交叉污染。⑤可使用生化分析儀的試劑針、比色杯清洗程序，對試劑針、比色杯進行2次或多次清洗。用堿性清洗液或酸性清洗液沖洗試劑針可以有效地避免攜帶污染。⑥合理設置實驗項目的排列順序，避免試劑交叉污染。ALT 、AST、 TBIL、 DBIL 、TBA、ALP、GGT 、CHE 、TP、 Alb、Urea、 UA 、Cr、 CK 、CK-MB、HBDH 、LD、 TG 、TC、 HDL-C、 LDL-C、APOAI、APOB、 Amy 、CO2 、Glu、P 、 Fe、Ca、 Mg。 （僅供參考）⑦每個實驗項目所需的樣本量、試劑量不要隨意同比例降低，以保證反應液保持較大的緩沖能力。 
　　從試劑角度分析交叉污染的原因主要以下幾種： 
　　1.試劑成分的直接污染：上一個測定試劑中含有下一個測試所要測定的物質，直接干擾下一測試的測定結果。如：淀粉酶（AMY）試劑中含有較高濃度的鈣（Ca2+）；堿性磷酸酶（ALP）（IFCC法）、肌酸激酶（CK）（NAC法）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）（NAC法）、二氧化碳（CO2）（PEPC法）、AMY（EPS法）、三酰甘油（TG）等試劑中含有鎂（Mg2+）；葡萄糖（GLU）（氧化酶法）、總蛋白（TP）與酸性磷酸酶（ACP）試劑中含有較高濃度的鉀（K+）； 膽堿酯酶（ChE）、總膽固醇（CHOL）、GLU （GOD法）、尿酸（UA）（尿酸酶法）、乳酸脫氫酶（LD）（IFCC法）、羥丁酸脫氫酶（HBDH）（DGKC法）等試劑中可能含有磷酸緩沖液；CHOL、TG試劑及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑中可能含有膽酸鈉；丙氨酸氨基轉移酶（ALT）（IFCC法）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）（IFCC法）試劑中含有高活性的LD；以上試劑的交叉污染就分別會對Ca2+、Mg2+、K+（紫外酶法）、磷（P）、總膽汁酸（TBA）及LD的測定結果造成干擾。 
　　2.試劑成分參與反應：上一個試劑中含有的某種試劑成分與下一反應所要測定的底物有作用，因而干擾下一反應的測定結果。如：（1）Mg2+測定試劑的絡合劑亦能與鐵（Fe）結合，影響鐵與鐵絡合劑的結合；（2）直接膽紅素（DBil）（重氮法）試劑含有EDTA，Mg2+試劑中含有EGTA，均能與Ca結合，從而影響Ca的測定；（3）以甘油作為酶保護劑的試劑，會對TG的測定帶來干擾；（4）鈣（MTB法）試劑對K+有負干擾；（5）CHOL試劑中含有膽固醇酯酶，可水解膽固醇酯形成游離膽固醇，而引起對游離膽固醇測定的干擾。 
　　3.反應進程相同：上一個試劑所引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接的干擾，下一項目所測定的是前后兩個項目反應的綜合作用結果。如：（1）當上一反應產物為H2O2時，則對以Trinder反應產生顏色的測定結果引起干擾。如UA對CHOL結果的影響；CHOL對肌酐（CREA）（酶法）測定結果的影響；GLU（氧化酶法）對CREA（酶法）測定結果的影響。（2）CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）試劑中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶（HK）反應過程，因此可能對GLU的測定帶來干擾，尤其對GLU的HK法測定可能帶來嚴重干擾。 
　　4.影響反應條件：影響下一個項目的反應條件如pH等，從而改變反應速率。如：（1）DBil（釩酸鹽氧化法）試劑中含有表面活性劑的酒石酸鹽緩沖液會影響ALT活性，對測定結果有負干擾。（2）CREA（苦味酸速率法）反應條件為堿性，果糖胺（動力學法）反應條件為酸性，受到污染后反應速率會減慢。（3）CREA（酶法）試劑中含有抗壞血酸氧化酶，影響了氧化還原反應的進程，會對TBA（酶循環法）測定結果有影響。