目前，細菌內毒素檢查法(鱟試驗法)，應用于臨床藥物檢驗日益廣泛。為確保檢驗的準確性，現簡述幾個不容忽視的問題。
1、鱟試劑靈敏度復核問題
中國藥典1995版已明確規定，在鱟試驗前需進行鱟試劑靈敏度復核，計算標準差S應小于0.365，鱟試劑靈敏度λ:0.5λb≤λ≤ 2λb(λb為廠家標示值)。據筆者所見，使用鱟試劑檢查內毒素的單位均不進行復核試驗。而不同廠家生產的鱟試劑質量不盡相同。據筆者復核幾家鱟試劑顯示，試驗為陽性的檢品家兔法復核并無熱原反應。廈門鱟試劑廠的鱟試劑質量較好，復核試驗的靈敏度與標示靈敏度基本一致。以上情況應引起用戶注意，否則會影響結果的準確性。
2、干擾試驗
干擾試驗是評價樣品濃度對鱟試劑及內毒素凝集反應的干擾程度與性質，以便初步篩選出對檢查無干擾樣品的濃度范圍。若干擾試驗存在干擾，應注意最大有效稀釋MVD與最小有效濃度MVC的計算，
其計算方法如下:
MVC=λ· m/k式中λ為鱟試劑靈敏度，m為兔或人的最大劑量/kg，K為規定給藥途徑，臨床無任何不良反應的內毒素閾值靜脈為5.0 Eu·kg-1(包括皮內、皮下、腔內)。鞘內為0.2 Eu·kg-1。
MVD=樣品濃度/MVC或MVD=L/λ式中L為樣品內毒素限值)。若鱟試劑的靈敏度λ= 0.25 Eu·ml-1，人的最大劑量為30 mg·kg-1或2 ml·kg-1(樣品濃度為15 mg·ml-1)則:MVC=0.25 Eu·ml-1× 30 mg·kg - 15.0Eu·Kg-1= 1.5mg·ml-1MVD=15mg·ml - 11.5mg·ml-1= 10倍或:MVD=Lλ=km·λ=5Eu·Kg - 12ml·Kg - 1× 0.25Eu·ml-1= 10倍
在進行干擾試驗時，如樣品以基準稀釋倍MVD為起點，等倍往下稀釋，應根據出現陽性反應的稀釋倍數求出適合這種稀釋倍數的鱟試劑靈敏度。如某樣品的基準稀釋倍數為5倍、L值= 2.5 Eu·ml-1;于5倍、10倍稀釋并未出陽性，而稀釋20倍時干擾試驗陽性，那么適合做20倍稀釋的干擾試驗的鱟試劑靈敏度:λb=LMVD20=2.5Eu·ml - 120= 0.125Eu·ml-1即這種樣品應以靈敏度為0.125Eu·ml的鱟試劑進行干擾試驗。
3、PH值問題
鱟試驗最適宜pH值為6.4～8.0，pH值過大過小都影響鱟試劑靈敏度及內毒素活性。最簡單解決pH值干擾的方法是稀釋減少干擾;在樣品中加入預先確定量的酸堿中和再稀釋或采用具有緩沖作用的鱟試劑。
4、鱟試驗中細菌內毒素的振蕩問題
中國藥典1995年版規定:內毒素復溶后應置旋渦混合器振蕩15 min，以后每稀釋一步需混合振蕩0.5 min。但是目前多數試驗單位沒有旋渦混合器，只輕輕振搖或不振搖直接進行試驗。某廠家報道，若采用旋渦混合振蕩法稀釋內毒素、效價測定結果與國際參考標準內毒素(IS)基本一致，若不經振蕩稀釋則內毒素效價比國際參考標準內毒素低(50～75)%。原因是，內毒素是親水與疏水雙重活性的兩性分子，脂性端LipidA端是脂多糖(LPS)的主要毒性部位，在實驗中與鱟試劑反應。復溶后如果不劇烈振蕩，Lipid A端由于疏水內毒素易形成泡狀囊，Lipid A位于囊的中心，而不能與鱟試劑充分接觸，影響陽性對照結果，誤以為實驗失敗。
5、藥物中細菌內毒素限值L
L值是指單位藥物中所含內毒素的最大允許量，藥品所含內毒素低于這個限值時，按指定途徑給藥是安全的。內毒素限量L= k·m-1式中k為內毒素閾值，m為藥品家兔注射劑量以ml·kg-1，mg·kg-1，u·kg-1等表示。
6、鱟試驗的環境問題
1995年版藥典只規定在實驗中防止微生物污染，而沒有作詳細環境規定。試驗者往往在未經凈化處理的環境中試驗，造成實驗失敗。筆者幾年的經驗證明。鱟試驗在凈化工作臺內進行，并進行嚴格的操作者消毒與隔離，效果是滿意的。
7、鱟試驗器具的選擇與處理
試驗器具對試驗結果有直接影響，采用一次性針管不符合規定，采用聚丙烯試管也不恰當。筆者認為，采用玻璃試管及金屬針頭，清潔液浸泡玻璃試管，洗滌劑浸泡金屬針頭。蒸餾水沖洗至pH呈中性，于250℃干烤30 min，實驗無失敗現象。
8、實驗鱟試劑靈敏度選擇
為了保證內毒素檢查與家兔試驗結果相一致，鱟試劑靈敏度應不超過0.5Eu·ml-1。