測定動物源性食品中激素殘留量實驗

動物組織

乙酸鈉-乙酸緩沖溶液 β-葡萄糖酸苷酶-硫酸酯酶溶液 甲醇 正己烷 水飽和乙酸乙酯

離心管 HLB固相萃取柱 液相色譜條件色譜柱

1.  前處理

稱取10 g樣品，準確加入內標溶液（13C-己烯雌酚、13C-睪酮、13C-雌二醇）（20 ng/mL）0.5 mL，加入10 mL pH5.2的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液，勻漿后，再加入β-葡萄糖酸苷酶-硫酸酯酶溶液10 uL，于（37±1）℃振蕩酶解過夜。取出冷卻后，加入36 mL甲醇振蕩提取30 min，轉入離心管2000 g離心10 min。上清液中加入40 mL正己烷提取兩次，棄去正己烷層。水-甲醇層中加入0.5 mL正丙醇，50 ℃旋轉蒸發去掉甲醇。

HLB固相萃取柱（6 mL， 500 mg）用6 mL甲醇、6 mL水活化。將旋轉蒸發后溶液中加入50 mL水，以2～3 mL/min的速度過柱，用6 mL水洗潘后，萃取柱用氮氣吹干。用10 mL 5  mmol/L三乙胺甲醇溶液洗脫，洗脫液氮氣吹干，加入0.3 mL三氯甲烷溶解殘渣，再加入3 mL正己烷用于下一步凈化。

桂膠固相萃取柱（6 mL，500 mg）用6 mL正己烷活化，溶液過柱，用5 mL正己烷洗滌。用6 mL水飽和乙酸乙酯洗脫，洗脫液氮氣吹干，用2 mL甲醇-乙酸乙酯（40 + 60）溶液溶解，以備過氨基柱。

氨基柱（6 mL，500  mg）用3 mL甲醇-乙酸乙酯（40 + 60）溶液洗滌，3 mL水飽和乙酸乙酯活化，將上步溶液過柱并接收，再加入3 mL甲醇-乙酸乙酯（40 + 60）溶液洗脫接收，氮氣吹干后，加入0.5 mL流動相溶解上機測定。

2.  測定

（1）雄激素測定液相色譜條件色譜柱：苯基柱（2.0 × 250 mm，5 um）；流動相：甲醇-水，梯度淋洗，初始條件為65%水-35%甲醇，保持3 min，27 min線性梯度使甲醇比例為100%，保持5 min，1 min內甲醇比例降到35%，保持20 min到下次進樣。流速：0.2 mL/min。

（2）雄激素測定質譜參考條件電離源：電噴霧正離子模式；毛細管電壓：3.5 KV；錐孔電壓：70 V；射頻透鏡1電壓：30 V；射頻透鏡2電壓：0.5 V；源溫度：100 ℃；脫溶劑氣溫度：300 ℃；脫溶劑氣流量：400 L/h；電子倍增電壓：650 V；噴撞室壓力：2.8 × 10-3 mbar；

（3）雌激素測定液相條件色譜柱：苯基柱（2.0 mm × 250 mm， 5 um）；流動相：乙腈-水，梯度淋洗，初始條件為65%水-35%乙腈，保持3 min，27 min線性梯度使乙腈比例為100%，保持5 min，1 min內乙腈比例降到35%，保持20 min到下次進樣。流速：0.2 mL/min

（4）雌激素測定質譜條件電離源：電噴霧負離子模式；毛細管電壓：3.1 KV；維孔電壓：80 V；射頻透鏡1電壓：40 V；射頻透鏡2電壓：0.5V；源溫度：100 ℃；脫溶劑氣溫度：300 ℃；脫溶劑氣流量：400 L/h；電子倍增電壓：650 V；噴撞室壓力：2.8 × 10-3 mbar。