實驗方法原理 利用血球計數板在顯微鏡下直接計數,是一種常用的微生物計數方法。此法的優點是直觀、快速。將經過適當稀釋的菌懸液(或孢子懸液)放在血球計數板載玻片與蓋玻片之間的計數室中,在顯微鏡下進行計數。由于計數室的容積是一定的( 0.1 mm2),所以可以根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來換算成單位體積內的微生物總數目。由于此法計得的是活菌體和死菌體的總和,故又稱為總菌計數法。
實驗材料 釀酒酵母菌懸液
儀器、耗材 血球計數板顯微鏡蓋玻片無菌毛細管
實驗步驟
1. 稀釋
將釀酒酵母菌懸液進行適當稀釋,菌液如不濃,可不必稀釋。
2. 鏡檢計數室
在加樣前,先對計數板的計數室進行鏡檢。若有污物,則需清洗后才能進行計數。
3. 加樣品
將清潔干燥的血球計數板蓋上蓋玻片,再用無菌的細口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣滴一小滴(不宜過多),讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自行進入計數室,一般計數室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產生。
4. 顯微鏡計數
靜止5分鐘后,將血球計數板置于顯微鏡載物臺上,先用低倍鏡找到計數室所在位置,然后換成高倍鏡進行計數。在計數前若發現菌液太濃或太稀,需重新調節稀釋度后再計數。一般樣品稀釋度要求每小格內約有5~10個菌體為宜。每個計數室選5個中格(可選4個角和中央的中格)中的菌體進行計數。位于格線上的菌體一般只數上方和右邊線上的。如遇酵母出芽,芽體大小達到母細胞的一半時,即作兩個菌體計數。計數一個樣品要從兩個計數室中計得的值來計算樣品的含菌量。
5. 清洗血球計數板
使用完畢后,將血球計數板在水籠頭上用水柱沖洗,切勿用硬物洗刷,洗完后自行晾干或用吹風機吹干。鏡檢,觀察每小格內是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈,則必須重復洗滌至干凈為止。
6. 結果
將結果記錄于下表中。A表示五個中方格中的總菌數;B表示菌液稀釋倍數。