血清與重氮試劑混合后，在規定時間所測定的膽紅素，相當于結合膽紅素含量，總膽紅素減去結合膽紅素的值即為非結合膽紅素。
該方法反應時間不同，結果相差很大。
【參考值】
結合膽紅素：0～6.8μmol/L（0～0.4mg/dl）
非結合膽紅素：1.7～13.2μmol/L（0.1～0.8mg/dl）
【臨床意義】
（1）當血清總膽紅素水平升高時，可根據結合膽紅素/總膽紅素來協助鑒別黃疸的類型。
肝細胞黃疸：
結合膽紅素/總膽紅素的比值常為20%～50%
梗阻性黃疸比值常＞50%
溶血性黃疸比值＜20%
（2）δ-膽紅素的意義：
δ-膽紅素半壽期大約21d，正常人血清中測不出，臨床意義不十分清楚，在梗阻性黃疸、溶血性黃疸時，含量增高。
在疾病的恢復期，總膽紅素下降，此時由于δ-膽紅素的半壽期較長，消失慢，因此相對百分比卻反而增高，最后可能達到總膽紅素的80%以上。可說明患者有時尿膽紅素已呈陰性，而血清膽紅素尚不恢復正常的原因。