海能LC7000檢測奶粉中的雙氰胺的方案
雙氰胺(別名二氰二胺、二聚氰胺)用途廣泛，是生產三聚氰胺的原料，也是醫藥和染料的中間體。在醫藥上用于制取硝酸胍、磺胺類藥物等。也可用來制取硫脲、胍、硝酸纖維素穩定劑、橡膠硫化促進劑、鋼鐵表面硬化劑、印染固色劑、人造革填料及黏合劑等。
此次新西蘭奶粉中雙氰胺的污染源頭是新西蘭農民普遍會在牧場使用雙氰胺化肥，目的是控制硝化菌的活動，使氮肥在土壤中的轉化速度得到調節，減少氮的損失，提高肥料的使用效率。
雙氰胺屬于低毒類化工品，其半數致死量(小鼠，經口)>4000mg/kg，空氣中最高容許濃度5mg/m3
1、實驗
1.1 儀器
儀器：Hanon-LC7000高效液相色譜儀，離心機，超聲波清洗機，渦旋振蕩器，離心機、萬分之一天平。
1.2 色譜條件
色譜柱：Venusil HILIC 5μm 100A；4.6*250mm；
流動相：A：10mmol/L乙酸銨(pH=4.0)；B：乙腈；A：B=10:90；
檢測波長：218nm；(UV掃描后雙氰胺在218 nm 的波長處有最大吸收)
進樣量：10ul；
柱溫：30℃；
流速：1ml/min
1.3 試劑和標樣
雙氰胺標準品， Venusil HILIC液相色譜柱，微孔濾膜，乙酸銨(分析純)、乙酸(分析純)、乙腈(色譜純)，實驗用水為超純水
1.4 樣品制備
樣品從生產商處獲得疑似含有雙氰胺的奶粉樣品2個。
1.4.1 樣品預處理：提取、凈化
奶粉樣品精密稱取1g后置于15 mL離心管中并分別加入10 mL水。經過1 min旋轉振蕩后，再將樣品超聲分散30 min。之后各加入1 mL稀釋的醋酸溶液(3%, v/v)，將樣品溶液在4 ℃條件下至少放置30 min。經過15 min離心后(離心轉速≥10000 r/min)，將上清液轉移至10 mL容量瓶中用去離子水定容。在進樣之前，樣品溶液用0.45 μm的濾膜過濾。
1.5 標準品制備、線性關系和定量限
精密稱取雙氰胺標準品50mg于50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為標準貯備液；
分別量取一定量的標準貯備液，用乙腈稀釋，配置成濃度為0.1ug/ml，0.5ug/ml，1.0ug/ml，2.0ug/ml，5.0ug/ml和10.0ug/ml的標準溶液，按照上述色譜條件，依次進樣檢測。以標準溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標建立工作曲線，得到線性方程Y=116.44X 3.2699 ，相關系數為 R=0.9997
定量限為：0.1ug/ml
1.6 結果和討論
1.6.1 色譜條件的優化
雙氰胺是一種親水化合物，在傳統的反相色譜柱(例如C18或C8色譜柱)上保留很弱。多數分析雙氰胺的RP方法都需要采用一種離子對試劑，例如辛烷硫酸鹽。在流動相中加入離子對試劑可以使雙氰胺得到較好的保留值，但是離子對試劑可能會包覆在反相固定相上而改變反相色譜柱的一些保留特性，可能對其他樣品在這根色譜柱上的分離造成影響。因此用HILIC 色譜柱分離雙氰胺，既得到了良好的保留，也實現了很好的分離度。
1.6.2 結果圖例
A:雙氰胺標準樣品的保留時間和重復性
上圖為用HILIC柱分離5次連續重復進樣10 μg/mL雙氰胺標準液的色譜疊加圖，可以看出在此色譜條件下雙氰胺得到了良好的保留和具有很好的重現性
B：2個奶粉樣品的雙氰胺分離疊加圖譜
上圖可見，譜圖2的樣品峰中檢測出了雙氰胺峰，與其他干擾峰的分離狀況良好
1.6.3 結果和討論
本文介紹了一種簡單有效的(液態牛奶和奶粉)前處理方法并結合海能LC7000高效液相色譜(HPLC)檢測樣品中的雙氰胺。利用10mmol/L乙酸銨(pH=4.0)和乙腈作為流動相，雙氰胺得到了良好的保留。這種流動相能夠防止離子對試劑損害色譜柱，使用該方法的背景噪聲小、檢出限低。并且新發展的樣品處理方法也能夠降低勞動強度并具有更高的回收率。
編輯：songjiajie2010