漲知識|徠卡顯微鏡的七種觀察方式之四

　　4、像差觀察(Phasecontrast)

　　在光學顯微鏡的發展過程中，相差鏡檢術的發明成功，是近代顯微鏡技術中的重要成就。我們知道，人眼只能區分光波的波長(顏色)和振幅(亮度)，對于無色透明的生物標本，當光線通過時，波長和振幅變化不大，在明場觀察時難觀察到標本。

　　相差觀察：相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進行鏡檢，也就是有效地利用光的干涉現象，將人眼不可分辨的相位差變為可分辨的振幅差，即使是無色透明的物質也可成為清晰可見。這大大便利了活體細胞的觀察，因此相差鏡檢法廣泛應用于倒置顯微鏡。

　　相差觀察原理：相差顯微鏡把透過標本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。光線透過標本后發生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了1/4λ(波長)，如果再增加或減少1/4λ，則光程差變為1/2λ，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減下，提高反差。在構造上，相差顯微鏡有不同于普通光學顯微鏡兩個特殊之處。

　　5、微分干涉觀察

　　微分干涉：(Differentia linterference contrast DIC)：50年代法國光學家諾曼爾斯基改良了沃拉斯頓棱鏡，在沃拉斯頓棱鏡基礎上完善了DIC理論及顯微鏡中DIC的使用方法

　　微分干涉原理：通過特制的棱鏡將偏振光分解相互垂直，強度相等的光束，光束載極近的兩點（小于顯微鏡的分辨率）有差別，使圖像呈現出立體三維感覺

　　DIC組件：檢偏鏡，2個DIC棱鏡（1個位于聚光鏡中，一個位于物鏡轉盤中）

　　優點：

　　可以使被檢物體產生三維立體感覺

　　觀察效果更直觀

　　無須特殊物鏡

　　與熒光觀察配合能更好調節背景和物體的顏色變化而達到理想的效果啊

　　缺點：

　　需要光強高

　　雙折射性物質不能達到DIC效果

　　不能應用于塑料容器培養物的觀察

　　檢測靈敏度有方向性，調節較復雜

　　主要應用：無色透明活體標本的細微結構，無色熒光標本，染色標本，顯微鏡操作等

　　6、熒光

　　熒光：

　　物質中的電子吸收的能量由低能狀態轉變為高能狀態，再回到低能狀態時釋放出的光，是非溫度輻射光-冷光。

　　顯微鏡熒光利用光源激發-光化熒光

　　熒光的性質：

　　吸收光，必須要有激發光源

　　熒光波長＞激發波長（損失熱能）

　　熒光強度極小于激發光的強度

　　有不同程度的衰減

　　熒光強度取決于激發光強度，被檢物質濃度，熒光效率

　　優點：

　　檢出能力高（放大作用）

　　對細胞的刺激小（可以活體染色）

　　能進行多重染色

　　用途：

　　物體構造的觀察-熒光素

　　熒光的有無，色調比較進行物質判別-抗體熒光燈

　　發熒光量的測定對物質定性，定量分析

　　7、霍夫曼觀察

　　霍夫曼觀察原理：斜射光照射到標本產生折射，衍射，光線通過物鏡光密度梯度調節器產生不同陰影，從而使透明標本表面產生明暗差異，增加觀察對比度

　　優點：

　　強立體成像效果，無光暈

　　塑料/玻璃培養皿適用

　　可檢測雙折射性物質

　　聚光鏡的工作距離大于DIC

　　背景與標本的亮度變化可調節

　　物鏡可用于明場、暗場、熒光觀察

　　缺點：調試，適用稍復雜，成本較高

　　應用：顯微操作，內部結構，外部形態觀察

　　至此，徠卡顯微鏡的七種觀察方式就給大家全部介紹完了。