摘要：建立了液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)測定尿液中的內源性類固醇激素的方法。尿樣經葡萄糖醛酸甙酶酶解后進行液-液提取，以甲醇-0.1%甲酸緩沖液(含0.02mol/L乙酸銨)(體積比為68∶32)為流動相，采用Cosmosil C18色譜柱分離,并以三重四極桿串聯質譜多反應監測掃描方式對尿樣中的脫氫表雄酮(DHEA)、睪酮、表睪酮、雄酮和苯膽烷醇酮等5種激素進行檢測。方法的最低檢出限為0.01～10ng/mL，平均回收率為96.7%～106.5%，日內和日間相對標準偏差(RSD)分別小于7%和11%。應用所建立的方法測定了健康志愿者口服DHEA后尿液中內源性類固醇激素的變化情況,結果表明該方法樣品處理簡便,色譜分離完全，結果準確可靠，可替代氣相色譜-質譜法用于體液中內源性類固醇激素興奮劑的常規分析。
1.樣品收集
健康志愿者6名，其中男性3名，女性3名。志愿者受試前留取空白尿液； 口服120 mg DHEA片劑后,再收集0～24 h的尿液，于-20℃下保存。
2.樣品處理
取尿液210 mL于試管中，加入5 ng甲基睪酮(內標)及210 mL pH6.8的磷酸緩沖液、150 μL β-葡萄糖醛酸甙酶(3 000 U)，于80℃恒溫水浴中培養3 h，取出后冷卻至室溫。再加入3.5 mL乙醚，混旋，離心，取出有機相并于60℃水浴中揮干，殘渣中加入100 μL 流動相溶解，供LC-MS/MS分析。
3.色譜及質譜條件
液相色譜：采用Cosmosil C18色譜柱(150 mm×2 mm，5μm )和Phenom enex C18預保護柱。流動相為甲醇-0.1%甲酸緩沖液(含0.02 mol/L乙酸銨) (體積比為68∶32) , 流速為200 μL/min。進樣量為5 μL。
串聯質譜：采用電噴霧電離源( ES I) ，在多反應監測(MRM )正離子模式下掃描。碰撞氣(CAD )壓力為48 263 Pa；氣簾氣(CUR)壓力為68 948 Pa；霧化氣(GS1)壓力為241 317 Pa；輔助加熱氣(GS2)壓力為275 790 Pa。噴霧電壓為5 500 V；離子化溫度( TEM )為500 ℃。