高效液相色譜柱的管理
列管理
制定并嚴格執行色譜柱管理的標準操作程序每個新采購的色譜柱必須登記包括:生產公司、商品名稱、型號、規格、采購時間、啟動時間、單價、柱保護液等。柱的分類和儲存、硅膠柱、化學鍵合硅膠柱、氰化物或氨基柱、離子交換樹脂柱和凝膠柱各使用一個柱盒,并在柱盒上標明類別。
裝在帶有列說明的小袋子里,并附在登記簿上。對于每個激活的列,用激活日期標記該列。
每個色譜柱每兩個月維護一次,特別是對于一些不常使用的色譜柱,因為放置時間長,容易干燥,每次都要做維護記錄。
對于失敗的支柱,記錄停止使用它們。它們不能隨意丟棄。它們是專門儲存的。如果需要填充現有支柱,可以使用存儲支柱的填充。在生產單位質檢部門,可以利用時間長、效率低的色譜柱檢測產品的中間體。
色譜柱的維護
色譜柱使用一段時間后,經常會遇到色譜柱被污染的情況,色譜柱效率會有一定程度的降低。適當的色譜柱保護方法可以延長色譜柱的使用壽命。
樣品和流動相的處理
注射前用濾膜過濾溶解的樣品,以去除不溶物質。如有必要,需對樣品進行預處理。如果流動相中存在不純物質,柱效率將受到影響,因此溶劑應為色譜級,至少是分析級,流動相在使用前應使用微孔膜過濾。
在流動相輸液管前安裝過濾器過濾器定期用甲醇超聲波清洗。如果效果不好,可以用10%稀硝酸浸泡清洗。對于堵塞嚴重的過濾器,清洗前可在火焰上燃燒。
保護柱(柱前)的使用:
對于更昂貴的色譜柱,可以在色譜柱前添加保護柱,以防止樣品中的雜質污染分析柱。對于制備柱,保護柱的使用尤其重要,因為其注射體積大。
一般治療:
硅膠,氧化鋁和凝膠色譜柱每次使用后用低流速和二氯甲烷或正己烷等長期溶劑洗滌; 鍵合相硅膠色譜柱,離子交換色譜柱和凝膠色譜柱先用蒸餾水洗滌,再用甲醇洗滌,然后用甲醇和蒸餾水按一定比例洗滌溶液,再過夜..
對于已使用一段時間且效率降低的塔,可采用以下方法進行再生。
再生包括活化(右/左)和純化(左/右)硅膠、氧化鋁和極性鍵合相色譜柱按以下順序洗滌:三甲基戊烷或己烷三氯乙烷-乙酸乙酯-丙酮-乙醇-水硅膠柱:蒸餾水和甲醇(洗滌時可加入少量二甲基胺)。
離子交換樹脂柱:
高濃度氯化鈉溶液(1-2摩爾氯化鈉溶液)可以再生大部分樹脂。一些與樹脂緊密結合的物質,如油脂,可以用低濃度堿溶液(如0.1毫升氫氧化鈉溶液)洗滌。吸附在固定相上的酸性有機物質用低酸堿度緩沖溶液洗滌,堿性有機物質用高酸堿度緩沖溶液洗滌,然后用蒸餾水←甲醇←二氯甲烷←甲醇←蒸餾水洗滌。
凝膠柱:
因為凝膠色譜柱根據待分離物質的分子量來分離物質,所以通常使用稀氫氧化鈉或非離子洗滌劑(0.2%-1%NP-40或Lubrol)來洗掉大部分結合物質。如果某些污染物不能去除,用24%或30%乙腈洗滌過夜以去除疏水蛋白,用30%-50%乙酸去除親水蛋白,用蛋白水解酶處理可分解凝膠中殘留的微量胃蛋白酶,然后用蒸餾水←甲醇←蒸餾水洗滌。
污染色譜柱的處理:
流動相或樣品中的不溶性物質由于強烈的物質污染而沉積在柱頭上,可通過以下方法洗滌:去除脂質可用四氫呋喃、乙腈或甲醇洗滌;蛋白質的去除可以通過用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸梯度洗脫來進行。當重復注入100-200毫升四氫呋喃時,一些高度疏水的化合物可以用乙腈或甲醇洗脫。
恥辱治療:
如果柱頭堵塞和污染嚴重,無效色譜柱用溶劑沖洗,只需打開色譜柱,除去塔頂填料并重新組裝:首先,除去不銹鋼燒結過濾器,檢查色譜柱床,常見的凹陷或污染的有色填料,除去不規則床層和有色填料,使色譜柱床變白并完全水平,然后使用甲醇作為糊狀填料勻漿,將糊狀填料勻漿滴在色譜柱上,并在重力作用下從勻漿中排出甲醇溶液,重復上述步驟,直至填料水平。
列的存儲:
首先,色譜柱在儲存前必須清洗干凈。色譜柱不能儲存在水或水性溶劑中,否則會導致微生物生長。
極性色譜柱可以用合適的溶劑如二氯甲烷洗滌。用甲醇洗滌鍵合相色譜柱;陰離子交換色譜柱用0.002%氯己定(雙氯苯雙胍己烷)的緩沖溶液洗滌,陽離子交換色譜柱用0.005%硫柳汞緩沖溶液洗滌。向凝膠色譜柱的緩沖溶液中加入0.02%疊氮化鈉,或用20%乙醇沖洗。塔的兩端是密封的,以防止溶劑蒸發干燥塔并引起塔結構的幾何變化。