液相色譜儀樣品檢測要點

液相色譜儀是一種精度極高的檢測儀器，在環境、食品、生物、醫藥行業都有廣泛的應用。本文簡單介紹在液相色譜儀檢測分析樣品的幾個要點。

    流動相比例調整：我國藥品標準中沒有規定色譜柱的長度及填料的粒度，因此每次檢測一個新樣品時都須重新調整流動相，所以建議第一次檢驗樣品時配備 適量的流動相即可，以免浪費。制備流動相的標準，主峰一般應調至保留時間為6~15分鐘為宜。弱電解質的流動相其重現性更不容易達到，應當注意充分平衡色譜柱。    

    樣品配制：樣品溶液從待檢測樣品原料中提取出來之后，須經氮吹儀提純結晶之后配置成一定濃度的溶液，再使用溶劑過濾器進 行過濾處理，方可進入儀器。除此之外，盛放溶液的溶劑避免使用塑料材質，塑料容器常含有高沸點的增塑劑，可能釋放到樣品液中造成污染，而且還會吸留某些藥 物，引起分析誤差。某些堿性藥物會被玻璃容器表面吸附，影響樣品中藥物的定量回收，因此必要時應將玻璃容器進行硅烷化處理。

    進樣量：檢測樣品的進樣量一般為10L，主要根據定量環的規格而定，目前多數HPLC系統采用定量環規格有10L、20L和50L，因此應注意進樣量是否一致。

    記錄時間：樣品進入色譜柱后，第一次測定時，應先將空白溶劑、對照品溶液及供試品溶液各進一針，并盡量收集較長時間的圖譜（30分鐘以上），以便確定樣品中被分析組分峰的位置、分離度、理論板數及是否還有雜質峰在較長時間內才洗脫出來，確定是否會影響主峰的測定。

    計算：檢測結果的計算主要根據色譜圖，色譜圖是色譜儀定性定量分析的依據。 色譜圖的橫軸表示保留時間，可以作為色譜儀器實現定性分析的依據；色譜峰上的極大值是定性分析的依據，而色譜峰所包羅的面積則取決于對應組分的含量，定量 分析的依據。需要注意的是，由于有些對照品標示含量的方式與樣品標示量不同，有些是復合鹽、有些含水量不同、有些是鹽基不同或有些是采用有效部位標示，檢驗時須注意。

    液相色譜儀檢測樣品注意事項如下：

①流動相濾過后，注意觀察有無肉眼 能看到的微粒、纖維，至少過濾三次；

②柱在線時，增加流速應0.1ml/min的增量逐步進行，一般不超過1ml/min，反之亦然。否則會使柱床下塌， 叉峰。柱不線時，要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率遞增上去（或下來），勿急升（降），以免泵損壞。

③安裝柱時，請注意流向，接口處不要留有 空隙。

④樣品液請注意濾過（注射液可不需濾過）后進樣，注意樣品溶劑的揮發性。

⑤測定完畢請用水沖柱1小時，甲醇30分鐘。如果第二天仍使用，可用水以低 流速（0.1~0.3ml/min）沖洗過夜（注意水要夠量），不須沖洗甲醇。另外需要特別注意的是：對于含碳量高、封尾充分的柱，應先用含5~10%甲 醇的水沖洗，再用甲醇沖洗。

⑥沖水的同時請用水充分沖洗柱頭（如有自動清洗裝置系統，則應更換水）。