液相色譜常見異常峰問題

    異常的色譜峰指的是色譜圖中的無峰或出現負峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對稱等情況。一般來說，異常峰是實驗工作中較為棘手的問題。異常峰的出現會影響色譜分析的結果。通常情況下，峰型問題是由分離系統所決定的。在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區別對待，從主要問題出發，一個一個加以解決。
 

　　1.色譜圖中未出峰
 

　　系統未進樣或樣品分解;泵未輸液或流動相使用不正確;檢測器設置不正確
 

　　2.一個峰或幾個峰是負峰
 

　　流動相吸收本底高;進樣過程中進入空氣;樣品組分的吸收低于流動相。
 

　　3.所有峰均為負峰
 

　　信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒;光學裝置尚未達到平衡。
 

　　4.所有峰均為寬峰
 

　　系統未達到平衡;溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護柱被污染或柱效降低;溫度變化造成的影響。
 

　　5.所出峰比預想的小
 

　　樣品黏度過大;進樣品故障或進樣體積誤差;檢測器設置不正確.定量環體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現問題。
 

　　6.出現雙峰或肩峰
 

　　進樣量過大;樣品濃度過高;保護柱或色譜柱柱頭堵塞;保護拄或色譜柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
 

　　7.前伸峰
 

　　進樣量或樣品濃度高，溶解樣品的溶劑較流動相極性強;保護柱或色譜柱污染或失效。
 

　　①柱溫低：升高柱溫;②樣品溶劑選擇不恰當：使用流動相作為樣品溶劑;③樣品過載：降低樣品含量;④色譜柱損壞：更換柱子。
 

　　8.拖尾峰
 

　　柱超載，降低樣品量;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾，對樣品進行清潔過濾;調整流動相;硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值;柱內燒結不銹鋼失效，更換燒結不銹鋼;加在線過濾器，對樣品進行過濾;死體積或柱外體積過大，將連接點降至谷值;盡可能使用內徑較細的連接管;柱效下降，更換柱子;采用保護柱，對柱子進行再生。
 

　　9.出現平頭峰
 

　　檢測器設置不正確;進樣體積太大或樣品濃度太高。
 

　　10.出現鬼峰
 

　　進樣閥殘余峰，可能為上次樣品的殘余。在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統;樣品中存在未知物，改進樣品的預處理;流動相污染，更換新流動相，盡可能現配現用，隔夜的流動相再次使用時要過濾;盡可能使用HPLC級試劑;流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除。
 

　　11.峰分叉
 

　　①保護柱或分析柱污染：取下保護柱再進行分析,如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強保留物質污染,運用適當的再生措施。如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。②樣品溶劑不溶于流動相改變樣品溶劑,如果可能采取流動相作為樣品溶劑。
 

　　12.峰變形
 

　　樣品過載，減少樣品載量。
 

　　13.早出的峰變形
 

　　樣品溶劑選擇不恰當 ①減少進樣體積 ②運用低極性樣品溶劑
 

　　14.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
 

　　柱外效應 ①調整系統連接(使用更短、內徑更小的管路) ②使用小體積的流通池
 

　　15.酸性或堿性化合物的峰拖尾
 

　　緩沖不合適①使用濃度50～100 mM的緩沖液②使用Pka等于流動相pH值的緩沖液
 

　　16.額外的峰
 

　　(1)樣品中有其他組分：正常現象;
 

　　(2)前一次進樣的洗脫峰：①增加運行時間或梯度斜率②提高流速;
 

　　(3)空位或鬼峰：①檢查流動相是否純凈 ②使用流動相作為樣品溶劑 ③減少進樣體積。